求大神支招染E-cadherin冰冻切片荧光染色，我的步骤是PFA固定15min，PBS洗三次，BSA封闭2h，孵育一抗过夜

发布网友发布时间：2022-04-26 09:52

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热心网友时间：2023-10-09 07:14

冰冻切片的免疫组化染色步骤
速冻组织
　　将组织块平放于软塑料盖或特制小盒内（直径2cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮内，大约10-20秒组织即迅速冰冻成块。取出组织冰块立即置入-80℃冰箱储存备用，或置于恒冷切片机冰冻切片。
　　冰冻切片4~8mm，冰冻切片后如不染色，必须吹干，储存低温冰箱内，或进行短暂预固定后储存冰箱内保存。
　　室温放置30分钟后，入4℃丙酮固定10分钟。也可根据需要选择其它的固定方式。
　　PBS洗，5分钟×3。
　　用3%过氧化氢孵育5~10分钟，消除内源性过氧化物酶的活性。
　　PBS洗，5分钟×3。

热心网友时间：2023-10-09 07:14

把片子拿出来室温晾干，丙酮-20预冷后固定10min，PBST3x5min，BSA室温1h，一抗过夜
PBST 3X5min，二抗室温1h，PBST 3x5min，DAPI封片来自：求助得到的回答