透射电镜肾脏取材细切
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发布时间：2022-05-02 00:47
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时间：2022-06-25 18:08
生物样品, 透射电镜, 制备步骤
一．取材：
组织块小于1立方毫米
二．固定：
2.5%戊二醛，磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次
1%锇酸固定液固定 2-3小时
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次
三．脱水：
50%乙醇 15-20分
70%乙醇 15-20分
90%乙醇 15-20分
90%乙醇 90%丙酮（1：1） 15-20分
90%丙酮 15-20分
以上在4度冰箱内进行
100%丙酮 室温 15-20分三次
四．包埋：
纯丙酮+包埋液（2：1）室温 3-4小时
纯丙酮+包埋液（1：2）室温 过夜
纯包埋液 37度 2-3小时
五．固化：
37度烘箱内 过夜
45度烘箱内 12小时
60度烘箱内 24小时
六．超薄切片机切片 50-60 nm
七．3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色
八．透射电镜观察。拍片
由于生物样品含水太多，在电镜中会被真空蒸发掉从而破坏了结构，所以需要一些能够把水温和取代掉、并且自身没有结构的物质，这就是树脂包埋剂。正因为生物脆弱、结构容易破坏，所以才需要温和的制样方法，方法才这么复杂。生物电镜制样就是最主要的工作，看电镜倒是次要的。以下是生物样品超薄切片的流程图：
