设计pcr体系

发布网友发布时间：2022-04-30 14:09

共3个回答

热心网友时间：2022-05-23 17:22

你的引物怎么这么长？
预变性94℃ 5min，变性45s，退火温度看你引物是怎么设计的了。你这么长的引物估计退火温度肯定是60℃以上了。退火45s即可。72℃延伸1.5min到2min。（pfu聚合速度大约2KB/min）

热心网友时间：2022-05-23 17:22

变性退火延伸的温度一般为94--95 。 45--65 。 72。

具体的还需根据你那引物来

热心网友时间：2022-05-23 17:23

pfu酶最佳延伸温度是68度，所以建议你这样：
1，94度预变性3分钟
2，94度，1分钟-->68度2分钟。循环40次
3，68延伸5分钟

由于你的GC含量较高，最好在PCR体系中加入2%的DMSO

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