分子标记的理想要求
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发布时间：2022-04-30 03:36
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时间：2023-10-09 21:42
理想的分子标记必须达以下几个要求：⑴ 具有高的多态性；⑵ 共显性遗传，即利用分子标记可鉴别二倍体中杂合和纯合基因型；⑶ 能明确辨别等位基因；⑷ 遍布整个基因组；⑸ 除特殊位点的标记外，要求分子标记均匀分布于整个基因组；⑹ 选择中性（即无基因多效性）；⑺ 检测手段简单、快速（如实验程序易自动化）；⑻ 开发成本和使用成本尽量低廉；⑼ 在实验室内和实验室间重复性好（便于数据交换）。但是，发现的任何一种分子标记均通过电泳分离不同的生物 DNA 分子，然后用经标记的特异 DNA 探针与之进行杂交，通过放射自显影或非同位素显色技术来揭示 DNA 的多态性。
① *性片段长度多态性
(Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP）
1974年Grodzicker等创立了*性片段长度多态性（RFLP）技术，它是一种以DNA—DNA杂交为基础的第一代遗传标记。RFLP基本原理：利用特定的*性内切酶识别并切割不同生物个体的基因组DNA，得到大小不等的DN*段，所产生的DNA数目和各个片段的长度反映了DNA分子上不同酶切位点的分布情况。通过凝胶电泳分析这些片段，就形成不同带，然后与克隆DNA探针进行Southern杂交和放射显影，即获得反映个体特异性的RFLP图谱。它所代表的是基因组DNA在*性内切酶消化后产生片段在长度上差异。由于不同个体的等位基因之间碱基的替换、重排、缺失等变化导致*内切酶识别和酶切发生改变从而造成基因型间*性片段长度的差异。
RFLP的等位基因其有共显性特点。RFLP标记位点数量不受*，通常可检测到的基因座位数为1—4个。RFLP技术也存在一些缺陷，主要是克隆可表现基因组DNA多态性的探针较为困难；另外，实验操作较繁锁，检测周期长，成本费用也很高。自RFLP问世以来，已经在基因定位及分型、遗传连锁图谱的构建、疾病的基因诊断等研究中仍得到了广泛的应用。
② 数目可变串联重复多态性
(Variable Number of Tandem Repeats，VNTR）
数目可变串联重复序列又称小卫星DNA(Minisatellite DNA），是一种重复DNA小序列，为10到几百核苷酸，拷贝数10一10001不等。VNTR基本原理与RFLP大致相同，只是对*性内切酶和DNA探针有特殊要求：⑴*性内切酶的酶切位点必须不在重复序列中，以保证小卫星或微卫星序列的完整性。⑵内切酶在基因组的其他部位有较多酶切位点，则可使卫星序列所在片段含有较少无关序列，通过电泳可充分显示不同长度重复序列片段的多态性。⑶分子杂交所用DNA探针核昔酸序列必须是小卫星序列或微卫星序列，通过分子杂交和放射自显影后，就可一次性检测到众多小卫星或微卫星位点，得到个体特异性的DNA指纹图谱。
小卫星标记的多态信息含量较高，在17一19之间。缺点是数量有限，而且在基因组上分布不均匀，这就极大*其在基因定位中的应用。VNTR也存在实验操作繁琐、检测时间长、成本高的缺点。
