cDNA方面的一些疑问

发布网友发布时间：2022-04-30 03:33

共1个回答

热心网友时间：2023-10-09 19:47

　　没有区别。从同一段cDNA扩增得到的DN*段既可以克隆入原核载体，在原核细胞中表达，也可以克隆入真核载体，在真核中表达。不过，为了提高在真核细胞中的表达效率，可以在紧邻起始密码子前面加一个六个碱基的kozak序列（通常使用GCCACCATG，ATG就是起始密码子）。如果表达效率还是不能满足要求，可以考虑把密码子进行优化。不过这个一般用不着，仅供学习吧。

　　密码子优化。
　　遗传密码有64种，但是绝大多数生物倾向于利用这些密码子中的一部分。那些被最频繁利用的称为最佳密码子(optimal codons)，那些不被经常利用的称为稀有或利用率低的密码子(rare or low-usage codons)。实际上用做蛋白表达或生产的每种生物（包括大肠杆菌，酵母，哺乳动物细胞，Pichia，植物细胞和昆虫细胞）都表现出某种程度的密码子利用的差异或偏爱。大肠杆菌、酵母、果蝇、灵长类等每种生物都有独特的8个密码子极少被利用[1]。有趣的是，灵长类和酵母有6个同样的利用率低的密码子。大肠杆菌、酵母和果蝇中编码丰度高的蛋白质的基因明显避免低利用率的密码子。因此，重组蛋白的表达可能受密码子利用的影响（尤其在异源表达系统中）的事实并不很奇怪。你的基因利用的密码子可能不是你正在利用的蛋白生产系统进行高水平表达所偏爱的密码子，这种情况是可能的。利用偏爱密码子(preferredcodons)并避免利用率低的或稀有的密码子可以合成基因，基因的这种重新设计叫密码子优化。
　　这是一个在线的密码优化网站，不过你要仔细阅读说明。http://genomes.urv.cat/OPTIMIZER/追问

非常感谢您。我看的一篇文献中，cDNA进行PCR得到目的基因然后连到pFastBAC载体上，但好像是要加6个His，然后真核表达，而在原核中要添加GSTfusion protein，不知道为什么会有不同的操作，请大神帮忙解答？

从资料上截的图，“非融合表达载体”是基于“无融合基因标签”来划分的吗？

为什么药确保蛋白胨饿正确表达就要插入ATG和终止密码子？

请问您有没有关于这方面的资料呢？非常感谢。

追答　　加6个his就够了，不过加9个和镍柱的亲和力会更高一些。
　　GST和HIS是不同的TAG，类似的TAG还有很多。HIS-TAG既可以用于真核表达，也可以用于原核表达。
　　HIS-TAG的载体有不少，不过你说的这个载体我没用过，不好作评论。
　　起始密码子和终止密码子是表达蛋白的最基本元件，必须有。