如何用已有的cDNA，做出相应的蛋白质？请写出详细的操作步骤，谢谢

发布网友发布时间：2022-04-30 03:33

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热心网友时间：2023-10-09 19:47

可以利用基因工程技术进行蛋白质表达。
一个完整的基因克隆过程可以用分、切、接、转、筛五字概括。
分：即分离出感兴趣的外源基因----目的基因，其来源途径有：PCR技术，化学合成法，酶促合成cDNA，制备的基因组DNA。其中最常用的是PCR技术。
由于外源DN*段离开染色体是不能复制的，就需要将外源DNA连到复制子上，外源DNA则可作为复制子的一部分在受体DNA中复制。这种复制子即基因载体。
载体（vector）是指能够携带外源基因进入宿主细胞的DNA分子。载体应具备以下条件：1.带有复制子（DNA聚合酶识别位点）能在宿主细胞内携带外源基因一同进行复制。2.载体分子上应具有单一*酶切位点，以供外源基因的插入，一般将几个单一*性酶切位点构建在载体的一个部位构成多克隆酶切位点（Multiple Cloning Site,MCS）。3.具有筛选标志，即载体分子上能赋予受体细胞一定特性的特定基因顺序，例如抗药基因，编码酶的基因等，用于筛选含此载体的受体细胞。4.对于表达型载体还应具备能使外源基因表达的完整的转录单位。
载体按功能分类可分为克隆载体和表达性载体。前者以复制外源基因为目的，后者即能复制外源基因又能表达外源基因产物。按载体来源分类可以分为质粒载体，噬菌体DNA，病毒DNA，酵母人工染色体等，质粒是最常用的载体。
质粒（plasmid）是存在与于细菌染色体外的能独立复制的双链闭环的DNA分子，能赋予细菌某些特性的辅助遗传单位。其性质：1.根据质粒在一个细胞周期内产生拷贝的数量，可将质粒分为严谨型（低拷贝，复制1—2次）和松弛型（高拷贝，复制10—200次）。2.不相容性：是指同一类的不同个体质粒不能在同一个细菌中稳定共存，细菌经*后，细菌中只留下拷贝数较高的质粒，例如R1和R2两种抗药性质粒同属于一类，因此不能共同存在于同一细菌中。但不同类群的质粒可以在一个细菌*存。常用的质粒有pBR322，pUC18/19等。