各位大神 肿瘤干细胞成球实验怎么做啊?求protocol啊
发布网友
发布时间：2022-04-30 17:45
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热心网友
时间：2022-06-28 15:44
Formation Efficiency,
SFE）表示。对于某些肿瘤如胶质瘤和乳腺癌，它们的肿瘤干细胞在体外条件培养时相对较容易形成细胞球，而另一些上皮肿瘤如肝癌、结肠癌等则相对成球困难
些。
为了促进细胞的成球生长，近些年人们开始使用低粘附的培养板防止细胞贴壁，结合使用无血清培养基（加入B27和合适浓度的生长因子等添加剂，各种肿瘤报道的不尽相同，需要参考相关文献），以及使用1%浓度的甲基纤维素（methyl cellulose）抑制细胞聚集以确保一个细胞球来源于单个细胞等，建立了一套新的方法，获得了不错的效果。目前该方法已经在多种肿瘤干细胞的研究中得到应用。
SFE的计算方法：
使用上述方法培养10-14天以后，即可计算直径大于75um的细胞球的个数。
SFE=每孔中直径大于75um的细胞球的个数 / 每孔中原始接种细胞的总数
细胞球的传代：
通常情况下，我还需要检测细胞连续传代后的自我更新能力，此时就需要进行细胞球的传代。方法是，过70μm的细胞筛收集培养10-14天后的细胞球，使用胰酶消化成单细胞，将合适数量的细胞铺入96孔板继续进一步培养10-14天，统计细胞球的个数，计算SFE。
摘自：SenraiA. Mani, Wenjun Guo,
Mai-Jing Liao, Elinor Ng. Eaton, Ayyakkannu Ayyanan,Alicia Y. Zhou, Mary
Brooks, Ferenc Reinhard, Cheng Cheng Zhang, MichailShipitsin, Lauren L.
Campbell, Kornelia Polyak, Cathrin Brisken, Jing Yang, andRobert A.
Weinberg. The Epithelial-MesenchymalTransition Generates Cells with Properties of Stem Cells. Cell. 2008; 133:704–715.
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