如何制作共聚焦显微镜的细胞切片10
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发布时间：2023-11-02 05:17
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热心网友
时间：2024-06-13 18:52
石蜡切片法
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石蜡切片法是以石蜡作包埋剂,用旋转切片机将材料切成薄片,经一系列处理制成永久制片的方法.在研究植物的细胞,组织,胚胎以及形态等方面石蜡切片法是最理想的制片方法.
石蜡切片法的一般流程为:取材→固定→抽气→洗涤→脱水→透明→浸蜡→包埋→修块→切片→粘片→染色→封片.
取材
用锋利的刀片切取新鲜的植物材料,选定适宜的材料,立即固定.
取材的注意事项如下:
(1)取材料要新鲜.动作要迅速,以免挤压损坏组织;取病理材料时,应设置对照材料.
(2)所取材料大小要适当:根和茎一般直径≤5mm,切取成5-10mm小段;叶片一般取过中脉处,切成2-5mm宽,5-8mm长.在切材料时,必须注意刀片与中轴成直角,两切面平行,否则制成的切片细胞是斜的.
雌,雄蕊一般不需分割.
(3)取材时间可根据切片要求有所区别.如:在进行植物发育的研究过程时,需要找到细胞*相,一般在晴天的早晨9:00-10:00时取材,此时植物细胞*活动较明显.
(4)取材不易过老,否则制片有难度(过老的材料须在滑走切片机上进行);对纵切的材料适当多取材,如根尖,茎尖等,因为切到材料正中的概率较低.
(二)固定
将已切好的材料尽快地浸入相当于材料10-15倍体积的固定液中.借助固定液的作用,使细胞的新陈代谢瞬时停止,并保持细胞或组织的形态构造及其内含物的状态不发生变化.从而达到使组织变硬从而便于切片,增强内含物的折光度,令细胞易于着色的目的,同时具有防腐作用.以新鲜配制固定液效果较好.固定的时间依材料的种类,性质,大小等而定.材料固定完毕,保存于加盖的容器内,贴上标签.
良好的固定剂,应是穿透力强,使细胞立刻致死,原生质全部凝固;不发生任何变形,增强折光率,并且不妨碍染色.
常用固定液:
简单固定液
以一种化学药品配制的固定液.
热心网友
时间：2024-06-13 18:53
am，染核的话用dapi或者hoescht33342，染死细胞核的话用pi，染线粒体，内质网，endosome，actin等都有自己的染料。
然后，你根据不同的染料的说明配制溶液，养细胞，有些染料很快，比如dapi染细胞核就是分分钟的事情，有的染料要慢一些，那么就要多养一会儿。
如果你用荧光显微镜看，你首先要确定你的荧光显微镜可以用来看细胞，一般看哺乳动物细胞的显微镜是倒置的，如果你的显微镜是正置的，操作会比较麻烦。然后你要确定你的显微镜的激发光可以激发你要用的染料，比如，有的显微镜没有紫外光，那么就不能用dapi染细胞核。
如果你这些搞清楚了，你能正确操作显微镜，那么你就可以上镜去看了，注意，在荧光显微镜下，染料可能被淬灭掉，所以有些染料，你看得时候要快一点。
