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OPTI-MEM进行贴壁细胞培养的实验方法是什么?

发布网友 发布时间:2022-05-01 19:03

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热心网友 时间:2022-06-21 15:08

无血清培养基可以提供细胞贴壁需要的一些基质,本文总结了利用无血清培养基OPTI-MEM进行贴壁细胞的脂质体转染试验材料,步骤、个人经验以及问题分析。
贴壁细胞的脂质体转染
一、实验材料
1、宿主细胞CHO(贴壁细胞)
2、脂质体LIPOFECTAMINE 2000(invitrogen公司)
3、6孔细胞培养版
4、无血清培养基OPTI-MEM(GIBICO)
5、转染级质粒
二、实验步骤
invitrogen的LIPOFECTAMINE 2000说明书上列举了24孔、12孔、6孔......板的实验体系,因为需要转染的细胞量大,所以一直采用的是6孔版做的转染。以下是以6孔板为例说明一下我的体系和方法吧!
1、转染前一天,以合适的细胞密度接种到6孔培养板上。(我的接种密度是3~4*105/ml.)转染时,细胞要达到90~95%的融合。
2、溶液1:240ul 无血清培养基 + 10 ul lipofectamine 2000 per well (总体积250 ul)(温育5min)
3、溶液2:X ul 无血清培养基 + 4 ug 质粒 per well(总体积250 ul)
……
详细资料请参考:on
http://www.bio1000.com/experiment/cell/237988.html
OPTI-MEM进行贴壁细胞培养的实验方法是什么?

一、实验材料 1、宿主细胞CHO(贴壁细胞)2、脂质体LIPOFECTAMINE 2000(invitrogen公司)3、6孔细胞培养版 4、无血清培养基OPTI-MEM(GIBICO)5、转染级质粒 二、实验步骤 invitrogen的LIPOFECTAMINE 2000说明书上列举了24孔、12孔、6孔...板的实验体系,因为需要转染的细胞量大,所以一直采用的是6孔版做的...

实验室实验台材质分别有什么?

实验室实验台材质的选择对于实验室的功能、安全性和耐用性至关重要。根据实验室的具体需求和特性,常见的实验台材质包括不锈钢、钢木、全钢、PP等。不锈钢实验台具有优异的耐腐蚀性和易清洁性,因此广泛应用于化学实验室和生物实验室,尤其是在...

mRNA转染实验步骤

悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105,那么就用2×105的细胞进行转染。2.转染过程 ⑴取1ug(50pmol)的mRNA,加入一定量无血清稀释液,充分混匀,制成RNA稀释液,终体积为25μl。注意:无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DM...

Opti-MEM什么意思

又称为 减血清培养基,其中使用了 HEPES 和碳酸氢钠进行缓冲,并添加次黄嘌呤、胸苷、丙酮酸钠、L-谷氨酰胺、痕量元素和生长因子,其血清含量至少降低了 50% 。

lipo2000能用opti mem吗?

可以。将Opti-MEM培养基放到水浴锅中37℃平衡即可。Lipo转染试剂是一种多用途转染试剂,可在各种贴壁和悬浮细胞系中提供高效转染。是被引用次数最多的在售转染试剂之一。

转染用opti-mem选哪个货号

转染用opti-mem选无血清培养基 在做转染时,我们推荐用无血清培养基Opti-MEM®。这类培养基本身是不含有血清的,同时因为添加了化学成分有替代血清的作用。该培基用于细胞培养时,可以减小血清的添加量,因此叫做“Reduced Serum Medium”,即减血清培养基。

为什么用optimem培养基进行转染实验

2、optimem培养基有利于细胞恢复健康状态:其中使用了 HEPES 和碳酸氢钠进行缓冲,并添加次黄嘌呤、胸苷、丙酮酸钠、L-谷氨酰胺、痕量元素和生长因子。3、其他因素。【延伸回答】:无血清培养基Opti-MEM及用lipo2000或lipo3000转染质粒是否需要换液:关于lipo3000,及lipo2000转染后细胞是否需要换液,需要...

细胞转染补料液放多了怎么办

细胞转染补料液放多了解决方法:1.如为贴壁生长细胞,一般要求在转染前一日,必须应用胰酶处理成单细胞悬液,重新接种于培养皿或瓶,转染当日的细胞密度以70-90%(贴壁细胞)或2×106-4×106细胞/ml(悬浮细胞)为宜,最好在转染前4h换一次新鲜培养液。2.用于转染的质粒DNA必须无蛋白质,无RNA和...

RPMI培养基与MEM比哪个更适合Vero细胞培养

细胞(英文名;lTrans-EZ溶液和17。另一支中加入500μ:cell)并没有统一的定义,1%Glutamax,比较普遍的提法是.5mlOpti-MEM培养基.取两支无菌的50ml离心管。2,每瓶的细胞密度是8×106个。3。将Trans-EZ稀释液滴加到质粒管中。关键步骤。细胞融合度应大致为30-40%;NL-BH*DDD包装质粒和84μgpL...

293A和293T细胞以及293细胞有什么区别吗

Opti-MEM培养基,用电动移液器轻轻混匀。将Trans-EZ稀释液滴加到质粒管中,边加边轻轻晃匀。关键步骤:推荐使用Qiagen质粒大抽试剂盒或相当的试剂盒所制备的质粒。6. 室温孵育20分钟,使DNA和Trans-EZ充分结合形成转染复合体。7.取1支5ml的移液管,将得到的DNA-Trans-EZ复合体均匀滴加入到细胞培养...

optimem和dmem区别

opti-mem和dmem区别为opti-mem释义为adj.最适宜的n.最佳效果;最适宜条件;[生物学] 最适度。dmem是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基,是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量,同时又分为高糖型(低于4500mg/L)和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长...

为什么细胞要贴壁培养 细胞贴壁培养方法 体外培养细胞为什么能贴壁生长 贴壁细胞为什么能贴壁 精原细胞是贴壁培养 贴壁细胞不贴壁怎么办 细胞贴壁不好是因为什么 贴壁细胞贴壁产生的 细胞贴壁培养
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