全基因组重测序技术路线
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发布时间:2024-07-03 18:47
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时间:2024-07-18 04:50
首先,全基因组重测序的步骤是:从生物样本中提取基因组DNA,通过Covaris技术进行随机打断,随后通过电泳技术筛选出目标长度的DNA片段,通常在0.2至5kb之间。这些片段会被加上特定接头,进一步进行cluster制备,可以选择Solexa方法(利用单分子测序)或SOLiD方法(利用双末端扩增)进行扩增。以SOLiD为例,整个实验流程在图1-1中有详细描述。
双末端测序(Paired-End)的核心原理是通过获取DNA片段的两端序列,以提高测序精度和覆盖度。测序深度,即测得的碱基总量(bp)与基因组大小(Genome)的比率,是衡量测序量的重要指标。随着测序深度的增加,基因组覆盖度通常会提升,因为高深度的测序有助于减少错误率和假阳性结果。对于重测序个体,若采用Paired-End或Mate-Pair策略,当测序深度达到10至15倍时,可以确保基因组覆盖度的稳定和测序错误率的有效控制,无论是纯合体(HOM)还是杂合体(HET)的情况。
全基因组重测序技术路线
首先,全基因组重测序的步骤是:从生物样本中提取基因组DNA,通过Covaris技术进行随机打断,随后通过电泳技术筛选出目标长度的DNA片段,通常在0.2至5kb之间。这些片段会被加上特定接头,进一步进行cluster制备,可以选择Solexa方法(利用单分子测序)或SOLiD方法(利用双末端扩增)进行扩增。以SOLiD为例,整个...
全基因组重测序的技术路线
提取基因组DNA,利用Covaris进行随机打断,电泳回收所需长度的DNA片段(0.2~5Kb),加上接头, 进行cluster制备 (Solexa)或E-PCR (SOLiD),最后利用Paired-End(Solexa)或者Mate-Pair(SOLiD)的方法对插入片段进行重测序。图1-1,以SOLiD为例,说明整个实验方案。双末端(Paired-End)测序原理测序...
全基因组测序技术路线
基因组测序技术的流程通常包括以下几个步骤:首先,从样本中提取完整的基因组DNA,然后对DNA进行随机打断,目的是获取长度在0.2到5千碱基对(Kb)之间的片段。这些片段是后续测序的基础。接下来,对打断后的DNA片段加上特定的接头,这个过程旨在为片段提供标准的接口以便后续操作。这些片段随后会被用于基因...
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问题一:全基因组测序的技术路线 提取基因组DNA,然后随机打断,电泳回收所需长度的DNA片段(0.2~5Kb),加上接头, 进行基因簇cluster制备或电子扩增E-PCR,最后利用Paired-End(Solexa)或者Mate-Pair(SOLiD)的方法对插入片段进行测序。然后对测得的序列组装成Contig,通过Paired-End的距离可进一步组...
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