宝藏!转基因株系检测的N种方法
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发布时间：2024-05-13 22:04
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时间：2024-05-31 17:50
深入探索转基因株系检测的多种策略，伯小远带你走进PCR和基因表达的精密世界。PCR，这位科学魔术师，通过温度精准控制，通过变性-退火-延伸三步法，揭示了抗性基因（如HptII, Bar, NPTII）和目的基因的秘密。荧光定量PCR，如Taqman探针法和SYBR Green I法，不仅用于相对表达的定量，还能进行绝对拷贝数鉴定和基因型识别，是检测的黄金标准。
图1-5犹如解码器，展示了PCR体系的运作，以及qRT-PCR和Western blot的直观演示。SDS-PAGE和Western blot技术联手，通过蛋白电泳和抗体检测，揭示蛋白表达的动态变化，如FIE蛋白随春化时间的变迁（图7）。免疫层析试纸条，如图8所示，只需短短15分钟，即可快速鉴定抗性蛋白，其原理基于夹心法，以Bar蛋白检测为例（图9）。
Southern blot，这位精准的拷贝数测量大师，通过酶切、电泳和杂交，揭示基因插入的拷贝数影响（图10）。而荧光定量PCR，作为快速而便捷的选项，尽管成本高，操作复杂，却因其绝对定量能力而备受青睐（图11）。
鉴定植株纯合性，过表达株系可以直接验证，自交或拷贝数分析是常用手段，而基因编辑株系的检测则需要PCR扩增和测序，通过CRISPR/Cas系统解析突变类型（图12）。
基因修复途径中，NHEJ作为主要修复机制，揭示了不同突变类型的多样性（图13）。HR效率的低下，使得NHEJ后的突变类型包括无突变、单等位基因突变和双等位基因突变（图14）。
研究者关注同源突变的细微差别，尤其是嵌合体和多倍体带来的复杂性，这需要精心设计引物以进行精确检测（图15）。
二代测序技术的崛起，为基因编辑检测带来了革命性的效率提升，包括引物设计、PCR扩增和测序分析（图16）。实例展示基因编辑检测结果的多样性，以及突变类型的清晰解析（图17）。
创建突变体库，CRISPR/Cas技术如虎添翼，包括PCR鉴定、sgRNA确认和突变类型验证（图18）。对于转化率高的物种，检测流程得以简化，如SALK突变体纯合性检测（图19）。
数字PCR、等温扩增、ELISA和Western等方法，共同构成了转基因检测的多样阵容。高通量与自动化，是未来检测技术的鲜明趋势，创新不息（图20）。
参考文献中，如Mol Plant（2015）、Front Plant Sci（2021）、Hortic Res（2022）等，详尽记录了这些方法的应用和进展（图21-24）。
