洗涤液配制的注意事项有什么?

发布网友发布时间：2024-07-02 18:50

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热心网友时间：2024-07-24 05:22

实验助手：探索洗涤缓冲液家族（上）——TBST、PBST与RIPA的秘密配方

在生物实验中，精确的洗涤缓冲液是保证实验准确性和结果清晰的关键。让我们一起深入解析三种常用洗涤液：TBST、PBST和RIPA，了解它们的组成、配置方法以及最佳使用实践。

1、TBST——多用途洗涤大师

TBST，即Tris-Borate-Sodium Tween-20缓冲液，是免疫印迹等实验的常客。它的配方（1X浓度）包括：1L的10X PBS缓冲液（1.37 M NaCl, 27 mM KCl, 100 mM Tris, pH 7.4），加入0.1%的Tween-20（1 mL/L PBS），再补足至1L以获得最终浓度。配置步骤如下：首先，用蒸馏水稀释10X PBS至1X，再加入Tween-20，混合均匀后过滤或离心去杂质。最后，分装到无菌瓶中，存放在4℃的阴凉处，避免反复冻融。

2、PBST——免疫印迹的好帮手

PBST则以磷酸盐缓冲液为基础，加入NaCl和 Tween-20，为免疫印迹实验提供高效清洗。配方为10X PBS（1.37 M NaCl, 27 mM KCl, 100 mM Na2HPO4, 18 mM KH2PO4, pH 7.4）稀释至1X，再加0.1% Tween-20。与TBST相似，配制后过滤，分装并保存在适宜条件下。

3、RIPA——细胞裂解液的秘密武器

RIPA缓冲液，专为提取细胞和组织中的蛋白质而设计。它的配方包括水、10x缓冲盐溶液、脱氧胆酸钠盐、非离子性脱氧胆酸、磷酸二氢钠、乙二胺四乙酸和酸化酚。配置时，先将水与缓冲盐溶液混合，再依次加入其他成分，确保溶解均匀，最后调整pH值为7.4。RIPA对提取过程中蛋白结构的保护至关重要。

每种洗涤缓冲液都有其特定的用途和要求，正确使用它们可以提升实验效率，确保数据的准确性和可靠性。在实际操作中，记得遵循配制步骤，妥善保存，以充分发挥它们在实验中的作用。