western blot 的原理是什么?

发布网友发布时间：2024-07-02 18:12

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热心网友时间：2024-07-11 05:19

深入探索 Western blot 这一科学瑰宝，你是否好奇它的魔力？蛋白质免疫印迹，或简称 Western blot，是生物实验中不可或缺的工具，它通过精密步骤揭示组织和细胞中蛋白表达的秘密。首先，让我们走进这个过程的核心——从提取蛋白开始，这并非易事，尤其是组织蛋白，需要细致的预实验来排除干扰因素，务必在低温环境中操作，以保护宝贵的生物活性。细胞蛋白的提取则相对简洁，但同样需要准确的浓度测定，BCA 测定法在此大显身手，配合变性与loading buffer，为蛋白的电泳之旅做好准备。

电泳是Western blot的灵魂，根据目标蛋白的分子量选择合适的胶，marker的选择同样至关重要。浓缩胶，凭借其大孔隙结构，确保蛋白质均匀混合并充分迁移，随后通过调整电压来完成分离。转膜，湿转以其普遍适用性和高效性脱颖而出，尤其在220V、300mA的条件下，1小时20分钟内即可完成，但转膜液的新鲜度和蛋白特性需密切留意。

当蛋白质成功定位在膜上，ECL发光技术登场，通过1:1混合A液和B液，新鲜的发光液能带来更佳的可视化效果，根据蛋白信号的强弱，调整发光时间。至于后续的数据处理，Photoshop和ImageJ是你的得力助手，前者调整条带对比度，后者则通过测量蛋白灰度值，帮助校正BCA浓度可能的误差，确保数据的准确性。

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