细胞株，求助
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发布时间：2024-05-02 00:20
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热心网友
时间：2024-08-23 04:50
热心网友
时间：2024-08-23 04:51
HeLa 人宫颈癌细胞 信息及培养方法如下
HeLa是第一个来自人体组织经连续培养获得的非整倍体上皮样细胞系，它由GeyGO等在1951年从31岁女性黑人的宫颈癌组织建立。经原始组织切片重新观察，Jones等将其诊断为腺癌。已知该细胞系含有人乳头状瘤病毒HPV18序列，需在2级生物安全防护台操作。该细胞角蛋白阳性，p53表达量较低，但表达正常水平的pRB（视网膜母细胞瘤抑制因子）。
基本信息
细胞别称：HELA;He-La; HeLa-CCL2; Henrietta Lacks cells; Helacyton gartleri
细胞来源：宫颈
细胞形态：上皮细胞样
生长特性：贴壁生长
安全等级：BSL2
包装规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
倍增时间：2~3天
传代比例：1:3
保藏机构：ATCC; CCL-2；ATCC; CRM-CCL-2；CCTCC; GDC0009；JCRB; JCRB9004；
培养保存
培养体系：MEM（TM205） +10%FBS（TS500）
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%；温度：37℃
冻存条件：基础培养基+10%DMSO +20%FBS（TS500），液氮保存
传代步骤
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；
加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化；
按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀；
收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:4的比例进行。
冻存步骤
细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数；
4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x10(6)/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识；
将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
