...减少如何证明该细菌感染了噬菌体如何筛选该细胞的抗噬菌体突变珠_百...

发布网友发布时间：2024-04-06 08:29

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热心网友时间：2024-10-21 03:08

证明方法如下：

方法一：利用噬菌体与细菌的个体差异（优点是简单高效，无需高精尖设备）

噬菌体是细菌的病毒，噬菌体分为烈性噬菌体和温和型噬菌体，具有以下特性，个体非常小，一般为纳米级别，而细菌一般为微米级别，可以用滤膜将噬菌体从含有噬菌体的细菌培养液/细胞悬液中分离出来，具体操作如下：

将怀疑有噬菌体污染的细菌培养液（液体培养基）/细胞悬液（固体培养基上刮取样品于无菌水/生理盐水/PBS缓冲液中悬浮）用无菌注射器通过0.22微米无菌水性滤膜，因为细菌是无法通过滤膜的，而噬菌体可以通过。

将滤液接种到无噬菌体污染的已经培养过一段时间的细菌培养液或固体培养基上，如果有噬菌体则细菌培养液因噬菌体而裂解后有浑浊变澄清，或者固体培养基上的细菌菌落因噬菌体裂解出现菌落变透明（噬菌斑），那么就证明该细菌感染了烈性噬菌体。反之，可能是感染了温和型噬菌体，噬菌体整合到了细菌的染色体或质粒上了，这个时候需要提取细菌的总DNA，设计能够检测噬菌体的引物通过PCR来进行检测（噬菌体一般通过重复回文序列插入到细菌的基因中，具体可以查文献看该细菌一般有什么噬菌体，怎么检测）。

方法二：分子生物学方法（核酸检测是金标准，需具备分子生物学实验室条件）

直接设计能够检测噬菌体的引物通过PCR来进行检测（噬菌体一般通过重复回文序列插入到细菌的基因中，具体可以查文献看该细菌一般有什么噬菌体，怎么检测）。

方法三：电镜检测法（电镜直接检测，这个需要实验室具备电镜这样的设备）

关于筛选抗噬菌体突变株，这个就比较简单了，简述步骤如下：

首先建立突变体系获得诱变菌种，比如加入诱变剂、紫外诱变、高温诱变等等，诱变方法有很多种，可以根据实验室的实际情况选择。

将通过过滤分离的到的噬菌体接种到已经培养过一段时间的突变细菌培养液或固体培养基上，如果细菌培养液的浑浊度没有收到影响（与没有接种噬菌体的细菌培养物对比，比如测OD值），或者固体培养基上的细菌菌落也没有受到影响，那么恭喜你，你筛选到了噬菌体抗性菌株。

这里可以采用固体培养涂布筛选法，也可采用液体培筛选法，或者边突变边筛选，很多方法都可以组合，最好能设计高通量筛选方法，这方面可以去查相关文献。