流式细胞仪-调节荧光补偿是不是把其他颜色荧光都调到零是最好的？

发布网友 发布时间：2022-05-04 01:18

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热心网友 时间：2023-10-21 18:55

荧光补偿是因为每个荧光的光谱都比较宽。用你的例子来说，就是PI的荧光，不仅被PI这个通道的探测器所感应到，而且也同时被FITC的探测器感应到，所以一个PI染色会出现在双染的区域。另外FITC的荧光，也会同时被两个探测器所检测到。这时候就要做compensation.

你做compensation的时候，必须有3个管子，一个是无染料的，一个只染了PI的，另外一个只染了FITC。第一个管子，原来调节FL-1和FL-2的电压，是所有细胞都位于左下象限。然后保持电压不变，上FITC的管子，调节compensation 的数值(FL-2 - FL-1%），使FITC阳性的细胞都位于右下象限，但是在水平位置上和阴性细胞一致，而不是最低。然后再上PI的管子，调节compensation数值，使PI阳性的细胞都位于左上象限。在垂直位置上和阴性细胞一致，但不是最低。

简单的说，就是把单个阳性的染色放到属于原来自己的位置上。

只有这个设置好了，才能往下做实验。

从你的图上看，你四个象限的设置并没有用无染色的细胞来设置。PI的阳性阈值设的很高。参照是什么？FITC的参照阈值是什么？这些都必须用无染色的细胞来设置。追问非常感谢您详细的回答！我的参照都是双染的control组细胞，我是以control组细胞来调，没有设单阳孔；如果我把PI的阈值再调低，那control组的细胞团会更偏下，这个怎么解决？如果以双阴性来调节细胞团的位置的话，一般双染的细胞团会相对双阴性向右偏移。这个是什么原因？所以以双阴性来调节是不是不太恰当？

追答你的基本概念全错了，没有双阴性的，就无法设置阳性的gate。你如何判断那些是染色后的阳性细胞呢。
你说的向右移动，就是你compensation设置有问题，还有gate设置的问题

热心网友 时间：2023-10-21 18:55

荧光补偿是因为每个荧光的光谱都比较宽。用你的例子来说，就是PI的荧光，不仅被PI这个通道的探测器所感应到，而且也同时被FITC的探测器感应到，所以一个PI染色会出现在双染的区域。另外FITC的荧光，也会同时被两个探测器所检测到。这时候就要做compensation.

你做compensation的时候，必须有3个管子，一个是无染料的，一个只染了PI的，另外一个只染了FITC。第一个管子，原来调节FL-1和FL-2的电压，是所有细胞都位于左下象限。然后保持电压不变，上FITC的管子，调节compensation 的数值(FL-2 - FL-1%），使FITC阳性的细胞都位于右下象限，但是在水平位置上和阴性细胞一致，而不是最低。然后再上PI的管子，调节compensation数值，使PI阳性的细胞都位于左上象限。在垂直位置上和阴性细胞一致，但不是最低。

简单的说，就是把单个阳性的染色放到属于原来自己的位置上。

只有这个设置好了，才能往下做实验。

从你的图上看，你四个象限的设置并没有用无染色的细胞来设置。PI的阳性阈值设的很高。参照是什么？FITC的参照阈值是什么？这些都必须用无染色的细胞来设置。追问非常感谢您详细的回答！我的参照都是双染的control组细胞，我是以control组细胞来调，没有设单阳孔；如果我把PI的阈值再调低，那control组的细胞团会更偏下，这个怎么解决？如果以双阴性来调节细胞团的位置的话，一般双染的细胞团会相对双阴性向右偏移。这个是什么原因？所以以双阴性来调节是不是不太恰当？

追答你的基本概念全错了，没有双阴性的，就无法设置阳性的gate。你如何判断那些是染色后的阳性细胞呢。
你说的向右移动，就是你compensation设置有问题，还有gate设置的问题

热心网友 时间：2023-10-21 18:55

荧光补偿是因为每个荧光的光谱都比较宽。用你的例子来说，就是PI的荧光，不仅被PI这个通道的探测器所感应到，而且也同时被FITC的探测器感应到，所以一个PI染色会出现在双染的区域。另外FITC的荧光，也会同时被两个探测器所检测到。这时候就要做compensation.

你做compensation的时候，必须有3个管子，一个是无染料的，一个只染了PI的，另外一个只染了FITC。第一个管子，原来调节FL-1和FL-2的电压，是所有细胞都位于左下象限。然后保持电压不变，上FITC的管子，调节compensation 的数值(FL-2 - FL-1%），使FITC阳性的细胞都位于右下象限，但是在水平位置上和阴性细胞一致，而不是最低。然后再上PI的管子，调节compensation数值，使PI阳性的细胞都位于左上象限。在垂直位置上和阴性细胞一致，但不是最低。

简单的说，就是把单个阳性的染色放到属于原来自己的位置上。

只有这个设置好了，才能往下做实验。

从你的图上看，你四个象限的设置并没有用无染色的细胞来设置。PI的阳性阈值设的很高。参照是什么？FITC的参照阈值是什么？这些都必须用无染色的细胞来设置。追问非常感谢您详细的回答！我的参照都是双染的control组细胞，我是以control组细胞来调，没有设单阳孔；如果我把PI的阈值再调低，那control组的细胞团会更偏下，这个怎么解决？如果以双阴性来调节细胞团的位置的话，一般双染的细胞团会相对双阴性向右偏移。这个是什么原因？所以以双阴性来调节是不是不太恰当？

追答你的基本概念全错了，没有双阴性的，就无法设置阳性的gate。你如何判断那些是染色后的阳性细胞呢。
你说的向右移动，就是你compensation设置有问题，还有gate设置的问题