免疫共沉淀实验的原理与过程?
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发布时间:2023-05-25 00:14
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热心网友
时间:2023-07-28 10:56
免疫共沉淀Co-IP实验是一种通用的蛋白质相互作用研究方法,常用来鉴定两个或多个蛋白质之间可能存在的相互作用关系。
coip实验的原理:Co-IP实验通常依赖于特异性判断,即将目标蛋白质及其交互蛋白带有特定抗体空间上结合,并利用这一结合关系来沉淀出其它交互蛋白。
免疫共沉淀实验过程:
1、细胞裂解:首先需要将细胞或组织裂解释放内部蛋白质,使目标蛋白质能够被识别。
2、抗体偶联:接着需要将一个已知与目标蛋白质相互作用的特定抗体或蛋白A/G浸润到裂解产物中,以便定向提取相互作用的蛋白质。
3、Co-IP:使用分别偶联不同的亲和树脂来捕获不同的蛋白质。再通过洗涤、离心等操作,去除非特异性结合的蛋白质,最终将纯化后的蛋白质物通过电泳等技术进行分离和定量,来评估目标蛋白质与其潜在交互伙伴之间的相互作用关系。
4、检测已沉淀的交互蛋白:可以利用Western blot、ELISA等技术对沉淀下来的蛋白质进行定性和定量分析,来鉴定其中的交互蛋白,并观察其表达量、大小和含量等信息。
Co-IP实验是一种快速、方便、可靠的蛋白质相互作用研究方法,具有高度的特异性和敏感性。它的主要优点在于荧光共振能量转移FRET和近距离扩散BRET等新的高通量分析方法的引入,这一技术也是分析蛋白质相互作用的主流方法。
热心网友
时间:2023-07-28 10:56
亲,您好!免疫共沉淀技术(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)以抗体和抗原之间的专一性结合作用为基础,用于检测和确定生理条件下蛋白质之间的相互作用。其基本原理是将细胞在非变性条件下裂解,在细胞裂解液中加入特异性的抗体,这样抗体可以和已知的抗原形成抗原–抗体复合物,如果在系统中存在与已知抗原相互作用的蛋白质,该蛋白质也会以复合物的形式沉淀下来,经过洗脱就可以得到与已知抗原相互作用的蛋白质,然后进行SDS-PAGE及Western blotting分析。
实验步骤
(1)转染后24-48 h 可收获细胞,加入适量细胞裂解缓冲液含蛋白酶抑制剂冰上裂解30min, 细胞裂解液于4°C, 最大转速离心30 min后取上清(2)取少量裂解液以备Western blot分析,剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液,4°C缓慢摇晃孵育过夜(3)取10μlproteinA琼脂糖珠,用适量裂解缓冲液洗3次,每次3,000 rpm离心3min;(4)将预处理过的10μlproteinA琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中4°C缓慢摇晃孵育2-4h,使抗体与proteinA琼脂糖珠偶连。
COIP 原理与实验流程
一、COIP原理:CoIP(Co-Immunoprecipitation)即免疫共沉淀,以抗体和抗原之间的专一性互作为基础,用于研究蛋白质相互作用的经典方法,是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效技术;属于免疫沉淀技术的一类,常被用于鉴定特定蛋白复合物的中未知蛋白组分。免疫共沉淀的设计理念是,假设一种已知蛋白是...
免疫共沉淀实验的原理与过程?
coip实验的原理:Co-IP实验通常依赖于特异性判断,即将目标蛋白质及其交互蛋白带有特定抗体空间上结合,并利用这一结合关系来沉淀出其它交互蛋白。免疫共沉淀实验过程:1、细胞裂解:首先需要将细胞或组织裂解释放内部蛋白质,使目标蛋白质能够被识别。2、抗体偶联:接着需要将一个已知与目标蛋白质相互作用的...
什么是染色质免疫共沉淀技术(ChIP)?
染色质免疫共沉淀技术是在保持组蛋白和DNA联合的同时,通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体,染色质被切成很小的片断,并沉淀下来的技术。这项技术主要用来分析目标基因有没有活性、或者分析一种已知蛋白(转录因子)的靶基因有哪些。该技术主要应用于以下几方面:1.组蛋白修饰酶的抗体作为“生物标...
免疫共沉淀的优点
其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。免疫共沉淀的实验过程:...
免疫共沉淀原理及步骤
免疫共沉淀
免疫共沉淀原理及步骤 免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)原理 IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“protein A/G"特异性地结合到抗体(免疫球蛋白)的FC片段的现象开发出来的方法。目前多用protein A/G预先结合在argarose beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的prorein A/G就能达到...
求做染色质免疫共沉淀的原理和大致步骤
,制备亲和纯化柱 对细胞进行甲醛交联,固定蛋白与核酸的结合物 将蛋白核酸复合物抽提出来,再将染色质片段通过超声或酶解,打断成小片段 将此小片段加到制好的亲和纯化柱上孵育 将未结合物质洗去 将目标蛋白核酸复合物洗脱收集 蛋白酶K加热解交联 纯化核酸 根据需要进行qPCR或者是测序,芯片等 ...
coip实验原理
coip实验原理:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。免疫共沉淀,是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整...
免疫共沉淀检测蛋白互作的原理和实验操作是什么?
步骤一: 提取细胞或组织的总蛋白,这是整个过程的基础。步骤二: 进行免疫共沉淀实验,运用抗体与目标蛋白的亲和性,实现蛋白质复合物的富集。步骤三: 通过Western Blot检测沉淀下来的蛋白质B,这一步是关键,确认B蛋白的存在,从而间接证实了它与A蛋白的互动。步骤四: 记录并分析实验结果,为后续的研究...
ChIP实验原理精讲
二、CHIP原理 利用抗体专一性特征,检测蛋白质-蛋白质相互作用。1、染色质免疫共沉淀 研究蛋白质与核酸相互结合的技术。甲醛固定时,相互靠近的蛋白与蛋白,蛋白与核酸(DNA或RNA)之间会产生共价键。细胞内,能够相互结合的蛋白与基因靠的比较近,或者契合在一起。此时甲醛处理能使它们之间产生共价键而...