脱氧核糖核酸染色简介

发布网友发布时间：2023-06-01 23:25

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1 拼音

tuō yǎng hé táng hé suān rǎn sè

2 英文参考

Deoxyribonucleic Acid Stain

3 概述

脱氧核糖核酸是组成细胞核的成分，与特殊染液作用，被染成浅红色或紫红色。

4 检查名称

脱氧核糖核酸染色

5 化验类别

血细胞化学染色、血液检查 > 血液检查

6 取材

血液

7 脱氧核糖核酸染色的原理

末端脱氧核糖核酸转移酶（terminal deoxynucleotidyl transferase，TdT）是一种细胞内酶，催化细胞的脱氧核苷酸，使其转移到低聚核苷酸或多聚核苷酸的3＇OH端而无需模板指导。兔抗牛TdT抗体能和人细胞的TdT产生交叉反应，可采用免疫荧光技术或酶标免疫细胞化学技术用辣根过氧化酶抗酶复合物（PAP immunoplex）在细胞涂片或组织切片上定位显示细胞内的TdT。

采用PAP免疫细胞化学技术得到的结果与免疫荧光法相一致，该法更加灵敏，阳性率增高，可精确的定位TdT。

8 试剂

（1）正常兔血清IgG。

（2）免抗牛TdT抗体1∶8稀释。

（3）羊抗兔IgG 1∶10稀释。

（4）PAP免疫复合物（PAP immunoplex from rabbit）1∶20稀释。

（5）二氨基联苯胺（3，3＇diaminobenzidine，DAB）溶液0.05mol/L TrisHCl9g/L NaCl液（pH7.4）100ml，含过氧化氢（V/V）为0.03%，4℃保存，用前加入30mg DAB，溶解后过滤，立即避光使用。

（6）过氧化氢甲醇固定液：甲醇液中含过氧化氢浓度为0.03%（V/V），4℃保存。

（7）0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.2）。

9 操作方法

（1）新鲜抗凝血标本，用比重1.077的淋巴细胞分离液作密度梯度分离，取淋巴细胞层细胞离心涂片，空气干燥。或不作细胞分离，直接涂片。

（2）涂片用过氧化氢甲醇液于4℃下固定20～30min，以阻断细胞的内源性过氧化酶。

（3）涂片在0.1mol/L磷酸盐缓冲液中浸泡15min，滴加正常兔血清，以减少抗体非特异性结合。

（4）滴加兔抗牛TdT抗体，37℃保温30min。

（5）滴加羊抗兔IgG抗体，37℃保温30min。

（6）滴加PAP免疫复合物，37℃保温30min。

（7）将涂片浸入DAB溶液，室温作用5～10min。

（8）水洗5min，干后镜检，或用哈氏苏木素染液复染胞核10min。

10 正常值

幼稚血细胞脱氧核糖核酸颗粒堆积、聚集、染色深、成熟血细胞脱氧核糖核酸颗粒分布均匀，细小，染色浅。

11 临床意义

1.鉴别细胞的成熟程度，如小原粒细胞与成熟淋巴细胞的区别，小原粒细胞染色浅、核仁明显；淋巴细胞染色深。

2.鉴别急性白血病的类型，原淋巴细胞反应较强，染色质染成粗颗粒；原粒细胞核反应减弱，染色质呈较淡的细颗粒状；原单核细胞反应最弱，染色质呈纤细网状，染色较浅。

（1）急性淋巴细胞白血病（DNA颗粒粗、色深、核仁小而少）。

（2）急性粒细胞白血病（DNA颗粒细、色淡、核仁多而大）。

（3）急性单核细胞白血病（DNA颗粒细、色淡、分布疏散）。

3.鉴别巨幼红细胞与正常红细胞，巨幼红细胞核染色淡呈细网状，正常红细胞核染色深呈粗颗粒至块状。