水螅的个体研究
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发布时间：2023-06-03 13:21
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时间：2024-11-29 21:44
一、实验准备
（一）材料 活水螅。
（二）用品 显微镜、表面皿（或培养皿）、载玻片、盖玻片、吸管（多个）、 8号针头、注射器（10 mL）、搪瓷盘、无水乙醇、茜素、碳酸氢钠、*、二甲苯、生石灰、中性树胶。
（三）药液配制
1．茜素酒精溶液 在体积分数为70％的酒精中加入茜素（加入量根据染色深浅的需要而定），再加少许碳酸氢钠，使之成饱和溶液，用时去掉沉淀只用上清液。制片时一定要现用现配。
2．饱和石灰水——*溶液 饱和石灰水3份，去掉沉淀后与市售*液1份混合。
3．一系列体积分数不同的酒精 需配70％、80％、90％、95％、100％各级体积分数，在每级酒精溶液中，也要加入少许碳酸氢钠，使各级酒精呈弱碱性或中性，便于神经细胞能顺利地染色。
4．酒精与二甲苯混合液 1份纯酒精和1份二甲苯混合而成。
二、方法步骤
（一）选个体小的水螅，以避免制片后水螅呈弯曲状，选出的水螅要饥饿l～2d，防止食物残渣在制片中沉积，影响观察效果。
（二）制片前0．5～l h，用吸管把水螅吸到表面皿中，加少量清水，待水螅附着伸展充分时，用注射器吸2 mL菌素酒精溶液，从水螅基盘向触手端快速喷出药液，以期尽快杀死水螅。操作时最好一人喷杀，另一人协助倾斜表面皿，以便把皿内的清水随着喷药而倒出，尽量保持染液中的酒精浓度。
（三）水螅杀死后，朝表面皿中再加菌素酒精溶液，浸没水螅，这时要将表面皿移到显微镜下，以便观察。水螅神经细胞染*况，在大约 15～30 min时间内，如果在显微镜下能看到紫红色网状结构，神经细胞边界清晰，界内染色适宜不显中空，神经细胞突起相连特点明显，这时就要用吸管移去染液。
（四）如果一切顺利，神经网显示清晰，加些体积分数为70％的酒精洗去浮色即可。如果确认染色过深，就要加体积分数为70％的酒精去色到适度为止。
（五）倒掉表面皿中的酒精，加入约2 mL石灰水一*溶液，约 5～10 min；倒掉石灰水一*溶液，再用体积分数为70％的酒精洗2次。
（六）用酒精对水螅进行脱水要从低浓度向高浓度逐步展开。先从体积分数为70％的酒精开始，浸泡 10 min后，用干净、干燥的吸管尽量吸净药液；再加人体积分数为80％的酒精，仍然是浸泡 10 min后，用另一支干净、干燥吸管将药液吸走；依此类推，用体积分数为90％、95％、100％的酒精分别对水螅进行脱水，在体积分数为100％的酒精中要连续脱水2次。吸走药液后，换人体积分数为100％的酒精与二甲苯混合液，浸泡 10 min后再换入二甲苯，做最后一道脱水程序，10 min后用吸管将标本从表面皿中吸到干净、干燥的载玻片上，调好位置，滴加中性树胶封片。
（七）将封片后的载片平放在搪瓷盘内，然后放进干燥温箱中 进行烘干，经l～2周后，检查装片确已干燥，就可贴上标签供观察用。
由于本方法可使水螅神经细胞和上皮肌细胞均被染色，这样在观察中就有一个如何区分这两种细胞的问题。将制好的装片放在低倍镜下观察，从视野中找出网状结构显示清楚之处，将其放置在视野*后，转换成高倍镜，在视野中如果看到细胞边界清晰，界内色深些不显中空，突起相连构成网状的细胞，就是神经细胞。
三、教学建议
本实验杀死水螅时，要求自基盘向触手方向喷药；染色时，要在显微镜下边观察边判断适宜度；脱水置换药液时，上一级药液要尽可能吸干净；观察时，要寻找细胞界内染色适宜不显中空，突起相连构成网状的部位。这些都是关键步骤，万勿马虎从事
