在real-time qpcr中,模板定量有哪三种方法

发布网友发布时间：2023-05-27 16:14

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热心网友时间：2024-12-13 11:08

在real-time qpcr中,模板定量有Real-time qPCR定量方法，绝对定量、2-∆∆Ct定量三种方法。

如何评估实时定量PCR反应的效果：

1、PCR扩增效率：为了正确地评估PCR扩增效率，至少需要做3次平行重复，至少做5个数量级倍数(5 logs)连续梯度稀释模板浓度。

2、R2值：另一个评估PCR效率的关键参数是相关系数R2，它是说明两个数值之间相关程度的统计学术语。如果R2等于1，那么你可以用Y值（Ct）来准确预测X值（量）。如果R2等于0，你就不能通过Y值来预测X值。R2值大于0.99时，两个数值之间相关的可信度很好。

3、精确度: 标准偏差（standarddeviation，偏差的平方根）是最常用的精确度计量方法。如果许多数据点都靠*均值，那么标准偏差就小；如果许多数据点都远离平均值，则标准偏差就大。实际上，足够多重复次数产生的数据组会形成大致的正态分布

这经常可通过经典的中心极限理论来证明，独立同分布随机变量在无限多时趋向于正态分布。如果PCR反应效率是100%，那么2倍稀释点之间的平均Ct间隔应该恰为1个Ct值。要以99.7%的几率分辨2倍稀释浓度，标准偏差就必须小于等于0.167。标准偏差越大，分辨2倍稀释的能力就越低。为了能够在95%以上的情况下分辨出2倍稀释，标准偏差必须小于等于0.250。