从植物叶片中提取复合氨基酸
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发布时间：2022-04-23 13:47
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时间：2023-10-16 12:15
1.3 方法�
1.3.1 供试样品的制备�
采取3个月生植株上的完整健全叶片，在80℃干燥箱中烘干，粉碎，准确称取0.5 g于10 mL安瓿瓶中，加入6 mol/L的HCl 7 mL，充入高纯N2，将安瓿瓶封口，置于105℃恒温干燥箱中消化过夜。冷却后过滤，滤液浓缩近干，加5 mL0.1 mol/L的HCl溶解，取1.5 ml至1.5 ml离心管中，10000转/min离心10 min，取上清液900 ul加入100ul 5nmol/ul内标物SAR，混匀后作为供试样品。�
1.3.2 标准溶液的制备�
5 nmol/L内标液制备：精密称取SAR 22.3 mg以0.1 mol/L HC1定容至50 mL。�
500 pmol/L内标液制备：精密吸取5 nmol/L内标液5 mL以0.1mol/L HC1定容至50 mL。�
900 pmol/L氨基酸混合标液制备：精密吸取900 ul 1000pmol/L氨基酸混合标液加入5 nmol/L内标液100 ul；�
225 pmol/L氨基酸混合标液制备：精密吸取900 ul 250pmol/L氨基酸混合标液加入5 nmol/L内标液100 ul；�
90 pmol/L氨基酸混合标液制备：精密吸取900 ul 100pmol/L氨基酸混合标液加入5 nmol/L内标液100 ul。�
1.3.3 色谱条件�
样品自动柱前衍生化程序：吸取硼酸缓冲液5 ul，再吸取OPA试剂1 ul，洗针1次，吸取样品1 ul，原位混合6次。吸取FMOC试剂1 ul，洗针1次，原位混合3次，进样。�
色谱柱：Hypersil AA-ODS C18 2．1×200 mm�
流动相A：醋酸钠1.36±0.025 g，加入纯水500 mL溶解，加EDTA溶液50 ul，再加三乙胺90 ul，用1％-2％ 醋酸调pH= 7.20±0.05，再加入四氢呋喃1.5 mL，混合均匀。�
流动相B：醋酸钠1.36±0.025 g，加入纯水100 mL溶解，用1％一2％ 醋酸调pH=7.20±0.05，将此溶液加至乙腈200 mL和甲醇200 mL的混合物中，并混合均匀。 �
柱温：40℃ 紫外检测波长：338 nm；�
梯度洗脱：流动相A：以0.45ml/min在0-17min由100%减至40%，17min-18min由40%减少至0；流动相B：以0.45ml/min在0-17min由0增至60%，17min-18min由60%增至100%，18.1min-23.9min流速由0.45ml/min-�0.80ml/min�，运行至24min结束。�
1.3.4 测定方法和数据处理�
分别精密量取对照品溶液和供试样品各1 ul，注入液相色谱仪，记录色谱图至脯氨酸峰出峰后即得。以3种浓度的标样制作校正表，按Agilent公司提供的氨基酸分析软件包进行数据处理。�
2 结果与分析�
2.1 紫苏属植物叶片中氨基酸组成及含量比较�
27份材料叶片中均测得17种氨基酸，其氨基酸种类较齐全。所测氨基酸中以甘氨酸平均含量最高，达6.68mg/g，其次是亮氨酸和谷氨酸，分别为4.77mg/g和4.59mg/g。与人体健康关系最为密切的赖氨酸平均含量有1.87mg/g。7种必需氨基酸总量平均为14.58mg/g，占氨基酸总量的比例为32.43%。�
氨基酸总量超过50 mg/g的材料共有6份（P06-11紫、P06-6、P06-7、P06-12紫、P06-15紫、P06-13），其中材料P06-7氨基酸总量最高，达57.65mg/g ，较总含量最低的材料P06-33多23.07 mg/g。17种氨基酸中有9种氨基酸（天冬氨酸、谷氨酸、苏氨酸、丙氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸）含量均以P06-7最高，而有6种氨基酸（丝氨酸、甘氨酸、酪氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸）含量的最低值出现在P06-33中。必需氨基酸含量变化范围在11.10 -19.55 mg/g之间，仍以P06-7为最高。非必需氨基酸含量的变化趋势与氨基酸总量的变化趋势大致相同。�
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各氨基酸在材料间的变异较大。变异系数最大的是脯氨酸，达59.19%，其次是组氨酸和赖氨酸，分别为29.91%和25.63%。异亮氨酸的变异系数最小，为11.34%，其它氨基酸的变异系数均在10%-20%之间。氨基酸总量、必需氨基酸和非必需氨基酸含量的变异系数在10%-15%之间。
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