DAPT是一种 γ 分泌酶 抑制剂
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发布时间：2023-05-07 14:46
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时间：2024-11-01 14:55
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生物活性
体外研究
DAPT 抑制 Aβ 产生超过 90%，仅影响培养基中 APPβ 的适度减少。尽管 DAPT 处理使 APPβ 降低了约 30%，但这种作用不依赖于浓度，并且通过去除 DAPT 可逆转. CNE-2 细胞用浓度增加的 DAPT（0、25、50 和 75 μM）处理，γ-分泌酶产生的 Notch 1 片段 Val1744-NICD 在 48 小时后以剂量依赖性方式减少（P<0.01 ）。50 μM 浓度的 DAPT 几乎完全抑制 γ-分泌酶的激活
MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
体内研究
将 DAPT 施用于 PDAPP 小鼠 (100 mg/kg sc)，并检查大脑皮层中 DAPT 和 Aβ 的水平。治疗后 3 小时，大脑中的 DAPT 峰值水平达到 490 ng/g，在最初的 18 小时内维持高于 100 ng/g (~200 nM) 的水平。这些脑内 DAPT 浓度超过其 IC50用于降低神经元培养物中的 Aβ (115 nM)，并产生强大且持续的药效学作用. DAPT 通过下调大鼠 Notch 1 和核因子 kappa B 的表达来保护大脑免受脑缺血。蛋白质印迹分析还显示 DAPT（0.03 mg/kg）组的 Notch 1 和 NF-κB 表达显着降低（与 MCAO 组相比，P<0.05）
MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
实验参考方法
细胞检测
转染APP基因的人胚肾细胞751(HEK 293) 用于常规 Aβ 还原测定。将细胞铺在 96 孔板中，并使其在补充有 10% 热灭活胎牛血清的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基 (DMEM) 中粘附过夜。细胞在 37°C 下用 DAPT（0、0.4、2、10、50 和 250 nM）预处理 2 小时，吸出培养基并应用新鲜的化合物溶液。在额外的 2 小时处理期后，取出条件培养基并通过对总 Aβ 特异的夹心 ELISA (266-3D6) 进行分析。相对于用 0.1% DMSO 处理的对照细胞测量 Aβ 产生的减少，并表示为抑制百分比。使用 XLfit 软件将来自至少六次重复给药的数据拟合到四参数逻辑模型，以确定效力
MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
动物实验
老鼠
三到四个月大的杂合 PDAPP 转基因小鼠过表达 APPV717F淀粉样前体蛋白的突变形式。每个治疗组 (n = 10) 由相等数量的年龄匹配的雄性和雌性动物组成，这些动物在治疗前禁食过夜。治疗组和对照组均以 10 mL/kg 的体积与 DAPT 或单独的载体一起给药。处理组织并进行所有 Aβ 和 APP 测量。取出大脑后，将一侧半球的皮层均质化、离心，并将上清液用于 Aβ 测量。来自另一半球的皮层被快速冷冻以分析化合物水平。Aβ 水平表示为 ng/g 湿组织重量，并且相对于来自载体处理的对照动物的组织的平均 Aβ 水平计算百分比减少。使用 Mann-Whitney 非参数统计分析数据以评估显着性。
大鼠
使用雄性 Sprague-Dawley 大鼠 (260-290 g)。在 MCAO 后立即将 DAPT 溶液立体定向注入侧脑室 (LV)。左室的立体定向注射是在距前囟的-0.8 mm 前后坐标、±1.5 mm 中外侧和-4.5 mm 背腹坐标处进行的。30只大鼠随机分为三个手术组（每组10只）：假手术组，接受等体积PBS，不进行MCAO手术；MCAO 后接受等量 PBS 的 MCAO 组（MCAO）；和 DAPT 组在 MCAO 后接受 0.03 mg/kg 的 DAPT。术后 24 小时评估第一次神经功能，然后在术后 48 小时评估第二次神经功能。同时，测量并比较不同组间的脑含水量和梗死体积。
MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
