转膜从黑往红转
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发布时间：2023-04-13 09:55
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热心网友
时间：2023-10-09 09:06
制作转膜三明治“黑胶白膜”
放夹子、盖盖子“黑对黑，红对红”
转膜结束，打开电泳槽盖子，师姐的夹子却放反了！
但打开夹子，却看到膜上有彩虹marker？
仔细看了下，原来膜和胶也放反了...负负得正...
转膜原理
槽转印是一种传统的技术，凝胶/膜 “转膜三明治” 完全浸湿在Tris甘氨酸缓冲液槽中并施加电流，在凝胶上分离的蛋白带负电荷向阳极（膜）迁移。槽转印系统一般在恒定电压下运行，转移过程中缓冲液的混合让电流保持相对恒定。Tris甘氨酸缓冲液pH值为8.3，比大多数蛋白的等电点（pI）要高。
转膜操作步骤
1． 准备转膜缓冲液（转膜缓冲液在转膜过程中会产热，太热了胶可能会化掉哦！将缓冲液冷却至 4°C 会有利于热量的扩散，或者把转印槽放在4℃冰箱进行转膜。）
2． 按照凝胶的大小剪切滤纸和膜，注意在操作膜时一定要戴手套以避免污染。
2.1 PVDF膜：
(1) 将膜在甲醇中浸泡30秒。膜应均匀的从不透明变成半透明。
(2) 小心的将膜放入双蒸水中，浸泡2分钟。
(3) 小心的将膜放入转膜缓冲液中，至少平衡5分钟。
2.2 滤纸：临使用前在转膜缓冲液上简单浸泡下
2.3 凝胶：轻轻撬开玻璃板，切掉浓缩胶，把凝胶放到转膜缓冲液中湿润下，注意保证胶的完整性。
3． 制备转膜三明治：三明治夹套的黑色向下放置在干净的桌面上。首先把黑色海绵放在黑色交套上，接着是3层滤纸、凝胶、PVDF膜、3层滤纸、黑色海绵。（注意顺序不能错！）每一层都不能有气泡哦！使用滚轮轻轻滚动将气泡赶出。
4． 夹紧夹套，小心不要移动凝胶和滤纸三明治，用白色滑块锁住夹套。将夹套插入转移电泳芯中（注意黑色面朝向黑色面哦）。
5． 加入转膜缓冲液，使其没过转膜三明治，盖上安全盖，将电源线缆插入电泳电源开始电泳（注意正负极不要弄反）。
