怎样配制percoll细胞分离液
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发布时间:2022-07-18 09:55
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时间:2023-10-10 11:19
Percoll是经过聚乙烯吡咯烷酮 (polyvinyl pyrolidone, PVP) 处理的硅胶颗粒混悬液,对细胞无毒性和刺激性。Percoll混悬液的硅胶颗粒大小不一,经过高速离心后,可形成一个连续密度梯度,将比重不同的细胞分离纯化。
将1份10XPBS与9份Percoll贮存液混合,制成等渗Percoll悬液,此悬液被认为是100%Percoll悬液,其密度为1.1294g/ml。用PBS或细胞培养液稀释100%Percoll而获得所需密度的Percoll分离液用于相应细胞的分离。若分离淋巴细胞应使用1.0777g/ml,配制时用稀释液稀释60%即可。
取比重1.077的Percoll分离液X ml与离心管中,将等倍稀释的抗凝血1/2 X ml 小心叠加在分离液上,经水平离心(1500rpm)后,便得四个细胞层,从而分离出淋巴细胞。表层为死细胞残片和血小板,底层为粒细胞和红细胞,中间有两层,上层富含单核细胞,下层富含淋巴细胞。