不同分子量蛋白通过亲和层析柱速度不同?
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发布时间：2022-08-05 08:59
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时间：2024-12-03 23:47
大多数蛋白质在组织细胞中都是和核酸等生物分子结合在-起，而且每种类型的细胞都含有成千.上万种
不同的蛋白质。许多蛋白质在结构、性质上有许多相似之处，所以蛋白质的分离提纯是一项复杂的工作。到
目前为止，还没有一套现成的方法能把任何一种蛋白质从复杂的混合物中提取出来。但是对于任何一种蛋白
质都有可能选择一种较合适的分离纯化程序以获得高纯度的制品。且分离的关键步骤、基本手段还是共同
的。
蛋白质提纯的目的是增加产品的纯度和产量，同时又要保持和提高产品的生物活性。因此，要分离纯化
某一种蛋白质，首先应选择一种含目的蛋白质较丰富的材料。其次，应设法避免蛋白质变性，以制备有活性
的蛋白质。对于大多数蛋白质来说，纯化操作都是在0~4°C的低温下进行的。同时也应避免过酸、过碱的
条件以及剧烈的搅拌和振荡。另外，还要设法除去变性的蛋白质和其它杂蛋白，从而达到增加纯度和提高产
量的目的。
二、分离纯化蛋白质的一般程序
分离纯化蛋白质的- -般程序可分为以下几个
步骤:
(一)材料的预处理及细胞破碎
分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋
白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天
然状态，不丧失活性。所以要采用适当的方法将
组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法
有:
1.机械破碎法
这种方法是利用机械力的剪切作用,
使细胞破碎。常用设备有，高速组织捣碎机、匀
浆器、研钵等。
2.渗透破碎法
这种方法是在低渗条件使细胞溶胀
而破碎。
3.反复冻融法
生物组织经冻结后,细胞内液结冰膨胀
而使细胞胀破。这种方法简单方便，但要注意那
些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。
5.酶法
如用溶菌酶破坏微生物细胞等。(二)蛋白质的抽提
通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的
选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提，抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂(十二烷基
磺酸钠、tritonX-100等) ，使膜结构破坏，利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中，应注意温度，避免剧烈搅
拌等，以防止蛋白质的变性。
(三)蛋白质粗制品的获得
选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差
异进行的分离。常用的有下列几种方法:
1.等电点沉淀法
不同蛋白质的等电点不同，可用等电点沉淀法使它们相互分离。
2.盐析法
不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度
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时间：2024-12-03 23:48
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时间：2024-12-03 23:48
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时间：2024-12-03 23:49
大概原理是：把三种分子量不同的物质放到充满凝胶颗粒的层析柱中，然后用缓冲液洗脱。大分子会以较快的速度首先流出层析柱，而小分子需要花费较长的时间才能流经柱床，从而达到分离不同分子量蛋白质的目的。
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时间：2024-12-03 23:49
