制备细胞膜的方法

发布网友 发布时间：2022-05-30 10:24

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热心网友 时间：2023-11-08 01:24

活动目标

1．体验用哺乳动物红细胞制备细胞膜的基本方法。

2．使用高倍显微镜观察制备细胞膜过程中细胞的变化。

背景资料

生物膜的研究发展迅速。要研究生物膜的组成、结构及功能，首先必须分离出纯净的细胞膜。分离得到的哺乳动物的红细胞膜，一般称为“血影”。哺乳动物成熟的红细胞中没有一般真核细胞所具有的细胞核和细胞器，容易用它制备纯净的细胞膜。此外，哺乳动物的血液也比较容易获得，因而是研究细胞膜的理想材料。

从哺乳动物的红细胞中分离细胞膜，第一步是将血液收集在加有抗凝剂的容器内，用低速离心的方法从血液中分离出红细胞，然后用等渗缓冲液反复洗涤，经多次离心，去除血浆。第二步是在红细胞中加入低渗缓冲液，由于低渗溶液的作用，大量水分进入细胞，使红细胞胀破而溶血。第三步是将溶血的红细胞反复而充分地高速离心、洗涤，去除血红蛋白和其他的细胞内含物，最终获得比较纯净的红细胞膜。
操作指南

1．材料 新鲜的哺乳动物血液

2．用具 离心机，离心管，滴管，显微镜，载玻片，盖玻片，吸水纸，小烧杯。

3．试剂 柠檬酸钠或肝素（抗凝剂），生理盐水（质量分数为0．9%的NaCl溶液），蒸馏水或清水。

4．操作要点

教师在实验前做以下准备工作。

准备一定量的新鲜的哺乳动物血液，如羊血或猪血，在冰箱中静置一昼夜。用滴管将上清液吸去。再吸取1 mL的沉淀物，放入离心管中，加入生理盐水2 mL，在2 000 r/min条件下离心5 min。去除上清液，在沉淀中再加入生理盐水2 mL，再离心一次，去除上清液，留沉淀备用。以上操作的目的是洗去血浆成分，避免血浆对血细胞的缓冲作用，从而使红细胞的溶血现象更加明显。

学生的实验操作如下。

（1）取一个5 mL的小烧杯，加入生理盐水2～3 mL。

（2）用滴管在沉淀的下层吸取一小滴血细胞，滴入小烧杯的生理盐水中，以达到稀释红细胞的目的，以免观察时，由于细胞密度太大，影响观察效果。

（3）取另一个滴管，在小烧杯中轻轻搅拌，然后吸取少量的血细胞稀释液，在载玻片的*滴很小的一滴，加盖玻片。

（4）先在低倍镜下观察红细胞的正常形态，可见其边缘完整发亮。

（5）在盖玻片的一侧加一滴蒸馏水或清水，在另一侧非常小心地用吸水纸慢慢地吸引，防止把红细胞全部吸入吸水纸中而影响观察。边加水边观察，注意红细胞的形态变化。红细胞会随着水流向一侧漂移，观察时注意移动玻片。红细胞体积逐渐变大，变得非常鼓胀，在视野中可以找到少数胀破的红细胞，它们已失去完整发亮的边缘，变成弥散状。

5．需要注意的几个问题

（1）制作临时装片时，红细胞必须稀释，而且取红细胞的量要少。

（2）在高倍镜下观察，待观察清晰时，在盖玻片的一侧滴加蒸馏水，同时在另一侧用吸水纸吸引。上述操作均在载物台上进行，并随时调整镜筒高度，持续观察细胞的变化。在盖玻片一侧滴加蒸馏水的量要少，不能让盖玻片处于漂浮状态；同时在另一侧用吸水纸吸引时要小心，不要将血细胞吸走。

（3）要想取得好的观察效果，所用显微镜的放大倍数应在400倍以上。

（4）操作中要认真观察才能看到连续的变化过程。

1．分析实验原理

热心网友 时间：2023-11-08 01:25

首先是制备一定量的细胞，细胞的来源可以是培养细胞，也可以是某种组织。培养细胞的收集相对简单一些，直接用胰酶将细胞从培养瓶上消化下来，制成细胞悬浮液。比较易碎的组织细胞的收集如肝、脾等，可采用匀浆的方法，稍加研磨就可制成细胞悬液。有些结缔组织，直接研磨不易分离出细胞，可先用适量的胶原酶处理。细胞制备出来后，进行匀浆处理。匀浆的方法有多种，如用高速打碎机破碎，低渗，玻璃珠与细胞共振荡，冻融法，超声波打碎等。可根据实验需要和实验室条件来选择。无论选择哪种方法，都要尽可能保持膜的完整性。整个操作过程要避免过于激烈，pH、离子强度和渗透压等条件要适中，一般常用中性和等渗溶液。匀浆产生的细胞裂解物，可通过一系列差速离心再加上一个梯度离心来分离细胞膜与细胞器，梯度是根据细胞器的大小、密度和沉降特性来设计的。匀浆分步分离的第一步是差速离心，在一系列的离心过程中离心力逐渐加大，并且将细胞器加入到具有密度梯度的介质中离心，常用的分离介质有蔗糖、甘油、葡聚糖等。由于每种细胞器的大小和沉降特性不同，因此可被分离出来。如果只是分离细胞中的某种细胞器，可直接根据那种细胞器所对应的相对离心力，在细胞匀浆后进行离心分离。哺乳动物红细胞的结构比较简单，其细胞膜可用低渗离心的方法分离出来。如果是独特的细胞膜，可根据表面电荷的密度采用电泳的方法分离，也可根据大小采用凝胶过滤的方法分离

热心网友 时间：2023-11-08 01:25

制备细胞膜一般使用活的,成熟的红细胞。
因为我们研究细胞膜的性质需要的是纯净的细胞膜.为了这个目的我们需要做的是去除细胞内细胞器和细胞核的膜的干扰
选择红细胞的原因是红细胞在细胞分化的过程中,细胞核和细胞器大都已经退化消失,相比于其他结构复杂的细胞来说，分离的工作要简单很多。
我们所要做的是将红细胞浸在清水中，使它吸水涨破.然后就可以用离心的方法提纯了。
现在我们可以知道为什么一定要用活的细胞了.只有活着的细胞才可以吸水涨破.而且,死亡的细胞的细胞膜不再有流动性和半透性,对于研究细胞膜性质也是不利的

热心网友 时间：2023-11-08 01:26

【材料用具】猪血，蒸馏水，滴管，吸水纸，玻片，盖玻片，显微镜 。

实验原理
1．哺乳动物的红细胞只有细胞膜一种膜结构吸水。
2．红细胞在蒸馏水中吸水胀破。

实验过程

1．稀释：向新鲜的猪血中加适量的生理盐水。
2．制片：用滴管吸取少量红细胞稀释液，滴一小滴在载玻片上，盖上盖玻片，制成临时装片。
3．观察：将制成的临时装片在高倍镜下观察，待观察清晰时，用引流法使装片中的红细胞吸水。

减少血液中的血浆蛋白等杂物，保持渗透压，防止在稀释的时候就发生细胞破裂。

实验现象
部分红细胞：凹陷消失，体积增大，细胞破裂，内容物流出。

热心网友 时间：2023-11-08 01:26

1。哺乳动物成熟红细胞；因为哺乳动物红细胞发育到第六阶段成熟后，细胞质中的细胞器（包括细胞核）会消失，以全力运输氧气，这样经涨破分离后得到较纯净的细胞膜，不存在其他膜系统干扰。
2。涨破（外界浓度低于细胞内部，即低渗状态）；不变（等渗。。）；皱缩（高渗）
3。新鲜血液中加入抗凝剂（如柠檬酸钠等），血液分层，最下层为红细胞（中间是血小板及白细胞，上为血浆），分离出红细胞后用适量生理盐水稀释。。。