E.coliDNA连接酶和T4连接酶的区别

发布网友 发布时间：2022-04-23 05:37

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热心网友 时间：2022-06-03 16:37

1、作用不同

E.coliDNA 连接酶是生物体内重要的酶，其所催化的反应在DNA 的复制和修复过程中起着重要的作用。

T4-DNA连接酶即T4 DNA连接酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。

2、连接条件不同

用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DN*段；

用T4DNA连接酶直接将平末端的DN*段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DN*段加上poly（dA）-poly（dT）尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来；

先在DN*段末端加上化学合成的衔接物或接头，使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异，但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。

扩展资料：

粘性末端DN*段的连接

DNA连接酶最突出的特点是，它能够催化外源DNA和载体分子之间发生连接作用，形成重组的DNA分子。

平末端DN*段的连接

常用的平末端DN*段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。

同聚物加尾法

这种方法的核心部分是，利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶，它能够将核苷酸（通过脱氧核苷三磷酸前体）加到DNA分子单链延伸末端的3′-OH基团上。

由核酸外切酶处理过的DNA，以及dATP和末端脱氧核苷酸转移酶组成的反应混合物中，DNA分子的3′-OH末端将会出现单纯由腺嘌呤核苷酸组成的DNA单链延伸。这样的延伸片段，称之为poly（dA）尾巴。

反过来，如果在反应混合物中加入的是dTTP，那么DNA分子的3′-OH末端将会形成poly（dT）尾巴。因此任何两条DNA分子，只要分别获得poly（dA）和poly（dT）尾巴，就会彼此连接起来。

这种连接DNA分子的方法叫做同聚物尾巴连接法（homopolymertail-joining），简称同聚物加尾法。

衔接物连接法

所谓衔接物（linker），是指用化学方法合成的一段由10～12个核苷酸组成、具有一个或数个*酶识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。衔接物的5′-末端和待克隆的DN*段的5′-末端，用多核苷酸激酶处理使之磷酸化，然后再通过T4DNA连接酶的作用使两者连接起来。

接着用适当的*酶消化具衔接物的DNA分子和克隆载体分子，这样的结果使二者都产生出了彼此互补的粘性末端。于是我们便可以按照常规的粘性末端连接法，将待克隆的DN*段同载体分子连接起来。

DNA接头连接法

DNA接头，是一类人工合成的一头具某种*酶粘性末端另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸短片段。当它的平末端与平末端的外源DN*段连接之后，便会使后者成为具粘性末端的新的DNA分子，而易于连接重组。

实际使用时对DNA接头末端的化学结构进行必要的修饰与改造，可避免处在同一反应体系中的各个DNA接头分子的粘性末端之间发生彼此间的配对连接。

参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶

参考资料来源：百度百科-T4-DNA连接酶

热心网友 时间：2022-06-03 16:37

一、指代不同

1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。

2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。

二、原理不同

1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。

2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。

三、特点不同

1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。

2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。

参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶

参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

热心网友 时间：2022-06-03 16:38

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