Klenow 酶的简介

发布网友发布时间：2022-04-23 05:37

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热心网友时间：2023-07-14 04:43

分子量：约68kDa(单体)。　　活性定义：37℃30分钟时间内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)掺入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。　　酶活性检测条件：67mM potassium phosphate(pH7.4)，6.7mM MgCl2，1mM 2-mercaptoethanol，0.033mM dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml[H]-dTTP，62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。　　纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。　　酶储存溶液：25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v)glycerol。　　Reaction Buffer(10X)：500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl2，10mM DTT。　　缓冲液兼容性：在碧云天的内切酶反应缓冲液1X O、1X R、1X Y、2X Y中的活性为100%，在1X B、1X G中的活性为100%；在碧云天的Taq、Pfu DNA polymerase和M-MuLV反应缓冲液中的活性为100%。　　失活或抑制：75℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致KlenowFragment失活。金属离子螯合剂，无机焦磷酸盐(PPi)，大剂量的无机磷酸盐(Pi)均对Klenow Fragment有抑制作用。