丙二醛的测量方法

发布网友发布时间：2022-10-19 21:34

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热心网友时间：2024-03-11 09:54

一：原理
丙二醛（MDA）是常用的膜脂过氧化指标，在酸性和高温度条件下，可以与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的三甲川（3，5，5-三甲基恶唑-2，4-二酮），其最大吸收波长在532nm。但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与TBA显色反应产物的最大吸收波长在450nm，但532nm处也有吸收。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中MDA—TBA反应物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。低浓度的铁离子能够显著增加TBA与蔗糖或MDA显色反应物在532、450nm处的消光度值，所以在蔗糖、MDA与TBA显色反应中需一定量的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为每克千重100—300ug/g，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3+的终浓度为0.5umol/L。
二：试剂
1：质量分数为10%三氯乙酸（TCA）；
2：质量分数0.6%硫代巴比妥酸：先加少量的氢氧化钠（1mol·L-1）溶解，再用10%的三氯乙酸定容；
三：方法
1：MDA的提取称取剪碎的试材1g，加入2mll0%TCA和少量石英砂，研磨至匀浆，再加8mlTCA研磨，匀浆在4000r/min离心10min，上清液为样品提取液。
2：显色反应和测定吸取离心的上清液2ml（对照加2ml蒸馏水），加入2ml0.6%TBA溶液，混匀物于沸水浴上反应15min，迅速冷却后再离心。取上清液测定532、600和450nm波长下的消光度。
四：结果
C1=11.71D450
C2={6.45(D532 - D600) - 0.56D450}NW-1
C1——可溶性糖的浓度（mmol/L）
C2——MDA的浓度（·umol/L）
D450、0532、D600分别代表450、532和600nm波长下的消光度值。
N：提取液总体积（ml）
W：植物组织鲜重