蓝白斑筛选的原理是什么?
发布网友
发布时间：2022-12-10 22:47
共1个回答
热心网友
时间：2024-12-05 18:22
一些载体（如PUC系列质粒）带有β-半乳糖苷酶（lacZ）N端α片段的编码区，该编码区中含有多克隆位点（MCS），可用于构建重组子。
这种载体适用于仅编码β-半乳糖苷酶C端ω片段的突变宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有半乳糖苷酶活性，但它们同时存在时，α片段与ω片段可通过α-互补形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补。
由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，称为蓝白斑筛选。
缺点
由于多种原因，一些白色菌落可能不包含所需的重组质粒。连接的 DNA 可能不是正确的或未正确连接的，并且某些线性化载体可能被转化，其末端“修复”并连接在一起，从而不会产生 LacZα，也不会形成蓝色菌落。
突变也会导致 α 片段不被表达。完全没有载体的菌落也会出现白色，有时可能会在抗生素后显示为卫星菌落已用完。
蓝色菌落也可能包含插入物。当插入片段与 LacZα 基因“符合读框”且插入片段中不存在终止密码子时，就会发生这种情况。
以上内容参考 百度百科-蓝白斑筛选
