wb孵育完二抗能不马上曝光吗

要马上曝光。因为最后显色是依赖于膜上结合的二抗，二抗带有酶标记，通过酶与化学发光底物反应，产生信号，从而曝光可得结果，如果不做下一步，酶或者膜上的蛋白可能会降解，导致与底物的反应性变弱，甚至是消失，有可能引起实验失败的，而且一旦膜干燥以后，也有可能会引起其他的背景。所以不建议长时间不...

孵完二抗后洗干净，挡在TBST里面，可以第二天曝光，如果本身蛋白少，亮度低的话，不建议这么做。果把膜一直泡在PBST或TBST里放在4℃的话，对酶应该是没什么太大影响，有可能整体信号会稍弱一点，如果曝不出来可以再敷一下二抗。另外就是保存的时候一定要把二抗洗干净，二抗时间太长背景会很高。

封闭不充分，重新孵育。wb二抗孵育完不显影是因为封闭不充分，导致二抗孵育完不能立即显色，需要在wb检测前选择更加合适的封闭液，并适当延长优化封闭条件时间与温度。

可以。二抗的实质是一种蛋白，和一抗一样，也是属于抗体，二抗洗完可以留着第二天曝光， 一般二抗是可以重复使用的，当然保存条件要负20度以下，但次数不要太多，否则效价会降低，结果不准确。

wb条带可以反复曝光。第一次指的是第一次曝光，第二次指的是第二次曝光。第一次曝光5min应该不算长，但是有时候觉得目的蛋白的条带太浅或者没有条带，就尝试延长一下时间，然后就没任何东西，或者就只有一点背景了。ECL，两个蛋白石一起做的，actin和目的蛋白分开孵育一抗二抗。

根据查询二抗说明说得知，按照适当比例用封闭液稀释辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗。吸尽洗涤液后，立即加入稀释好的二抗，室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时后，回收二抗。孵育时间的设定主要是为了确保二抗能够充分地与一抗结合。孵育时间过短，会导致二抗与一抗的结合不充分，影响到后续的信号...

1.二抗孵育完后,回收,-20℃保存。1×TBST摇床上洗膜三次,每次10min。 2.一条目的蛋白即一张膜需要100ul发光液A和100ul发光液B,根据膜数计算用量,提前4℃混合好发光液A和B。 3.到暗室中加混合好的发光液,在胶片左上角剪一小角(和PVDF膜一致),曝光胶片,可分别不同时长曝光,如15s,30s,1min,5min等,然...

wb实验我只孵育二抗不孵育一抗的情况下在曝光时候会出现条带，这种用条带的深浅去判断是否是靶蛋白，这是非常不科学的。你的杂带浓，碰撞几率大，粘附一抗的机会多，因此它就会显出来，但切记这是杂带。当杂蛋白含量高到一定程度，“任何”一种一抗都可以在该位置显出条带。在默认抗体有效的情况下...

该实验二抗孵育条件是二抗稀释、孵育时间、孵育环境、孵育后的清洗。1、二抗稀释：二抗以1：5000至1：10000的比例稀释在封闭液或tbst中。 2、孵育时间：二抗孵育的时间在室温下0.5至1小时左右，在室温下孵育1至2小时。 3、孵育环境：二抗孵育的环境是室温，不需要冷藏。 4、孵育后的清洗：二抗孵育后...

2）一抗孵育后并回收，加入1x TBST缓冲液放置于摇床上快摇5min，共3次。使用5%脱脂牛奶按照1:1000稀释二抗，室温慢摇1h；3）二抗孵育完毕后，回收二抗，1x TBST快洗5min，共3次；4）洗膜结束后，将发光液敷在膜上，通过化学发光成像仪曝光，采集并使用image J分析灰度。