环丙氨嗪ELISA试剂盒检测方法?

发布网友发布时间：2022-11-26 06:28

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热心网友时间：2023-10-10 20:31

环丙氨嗪又称灭蝇胺，是一种昆虫生长调节剂类低毒杀虫
剂，有非常强的选择性，主要对双翅目昆虫有活性。其作用机理是使双翅目昆虫幼虫和蛹在形态上发生畸变，成虫羽化不全或受抑制。该药具有触杀和胃毒作用，并有强内吸传导性，持
效期较长，但作用速度较慢。环丙氨嗪对人、畜无毒副作用，对环境安全。

美正生物环丙氨嗪ELISA试剂盒是应用 ELISA 技术研发的药物残留检测产品，具有快速、简便、准确和灵敏度高等优点，操作时间需 45 分钟，能减少工作强度和操作误差。

二、实验原理

本试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法，在酶标板微孔上预
包被环丙氨嗪抗原，样本中残留的环丙氨嗪和此抗原竞争环丙氨嗪的抗体（抗试剂），加入酶标二抗（酶标物）后，经 TMB
底物显色，样本吸光值与其所含环丙氨嗪的含量呈负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中环丙氨嗪的残留量。

三、适用范围

可定性、定量检测鸡肉、猪肉、鸭肉样本中环丙氨嗪的残留量。

检测步骤

1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡 30min 以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于 2～8℃。切勿冷冻。

3、洗涤液在使用前也需回温。

4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做 2 孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

5、加标准品/样本：加入标准品/样本 100µL 到对应的微孔中，再加入酶标物 50µL/孔，然后加抗试剂 50µL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置于 25℃避光环境中反应 30min。

6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤液 250µL/ 孔，充分洗涤 4～5 次，每次间隔 10s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的*头戳破）。

7、显色：加入底物液 A 液 50µL/孔，再加底物液 B 液 50µL/ 孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置于 25℃避光环境中反应 15min。

8、测定：加入终止液 50µL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于 450nm 处（建议用双波长 450/630nm 检测，请在 5min 内读完数据），测定每孔 OD 值（若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定）。

注意事项

1、试剂及样本没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的 OD 值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为 2M 硫酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件：保存试剂盒于 2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进锡箔袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象：发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0 标准的吸光度（450/630nm）值小于 0.5 （A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
8、加入底物液 A 液和底物液 B 液后，一般显色时间为 15min 即可。若颜色较浅，可延长反应时间到 20min，但不得超过 20min。反之，则减短反应时间。
9、浓缩洗涤液如有结晶属正常现象，请加热溶解后使用。
10、该试剂盒最佳反应温度为 25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。