免疫组化和westernblot有什么区别
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发布时间：2022-10-26 13:59
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时间：2023-09-15 11:10
1、原理不同：
免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。
westernblot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。
2、组织定位不同：
免疫组化在组织定位和定性上比较准确，但是在定量上不够准确。westernblot因为有内参标定，所以在定量上要更加准确，但是在组织定位上不如免疫组化。
扩展资料：
一、免疫组化（SP法）操作步骤：
1、切片常规脱蜡至水。如需抗原修复，可在此步后进行。
2、缓冲液洗3min／2次。
3、为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色，将切片放在HydrogenPeroxideBlock中孵育10－15分钟。
4、缓冲液洗5min／2次。
5、滴加UltraVBlock，在室温下孵育5分钟以封闭非特异性的背景染色。
6、缓冲液洗5min／2次。
7、滴加一抗工作液37℃孵育 1－2小时。
8、缓冲液洗5min／2次。
9、滴加PrimaryAntibodyEnhancer（增强子），在室温下孵育20分钟。
10、缓冲液洗5min／2次。
11、滴加HRPPolymer（酶标二抗），在室温下孵育30分钟。
12、缓冲液洗5min／2次。
13、向1mlDABPlusSubstrate（或AECPlusSubstrate）中滴加1－2滴DABPlusChromogen（或AECPlusChromogen），混匀后滴加到切片上，孵育3－15分钟。
14、自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。
二、westernblot操作步骤：
1、SDS－PAGE试剂：见电泳实验。
2、匀浆缓冲液：1．0MTris－HCl（pH6．8）1．0ml；10％SDS6．0ml；β－巯基乙醇0．2ml；ddH2O2．8ml。
3、转膜缓冲液：甘氨酸2．9g；Tris5．8g；SDS0．37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至1000ml。
4、0．01MPBS（pH7．4）：NaCl8．0g；KCl0．2g；Na2HPO41．44g；KH2PO40．24g；加ddH2O至1000ml。
5、膜染色液：考马斯亮兰0．2g；甲醇80ml；乙酸2ml；ddH2O118ml。包被液（5％脱脂奶粉，现配）：脱脂奶粉1．0g溶于20ml的0．01MPBS中。
6、显色液：DAB6．0mg；0．01MPBS10．0ml；硫酸镍胺0．1ml；H202 1．0μl。
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时间：2023-09-15 11:10
1、原理不同：
免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。
westernblot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。
2、组织定位不同：
免疫组化在组织定位和定性上比较准确，但是在定量上不够准确。westernblot因为有内参标定，所以在定量上要更加准确，但是在组织定位上不如免疫组化。
扩展资料：
一、免疫组化（SP法）操作步骤：
1、切片常规脱蜡至水。如需抗原修复，可在此步后进行。
2、缓冲液洗3min／2次。
3、为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色，将切片放在HydrogenPeroxideBlock中孵育10－15分钟。
4、缓冲液洗5min／2次。
5、滴加UltraVBlock，在室温下孵育5分钟以封闭非特异性的背景染色。
6、缓冲液洗5min／2次。
7、滴加一抗工作液37℃孵育 1－2小时。
8、缓冲液洗5min／2次。
9、滴加PrimaryAntibodyEnhancer（增强子），在室温下孵育20分钟。
10、缓冲液洗5min／2次。
11、滴加HRPPolymer（酶标二抗），在室温下孵育30分钟。
12、缓冲液洗5min／2次。
13、向1mlDABPlusSubstrate（或AECPlusSubstrate）中滴加1－2滴DABPlusChromogen（或AECPlusChromogen），混匀后滴加到切片上，孵育3－15分钟。
14、自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。
二、westernblot操作步骤：
1、SDS－PAGE试剂：见电泳实验。
2、匀浆缓冲液：1．0MTris－HCl（pH6．8）1．0ml；10％SDS6．0ml；β－巯基乙醇0．2ml；ddH2O2．8ml。
3、转膜缓冲液：甘氨酸2．9g；Tris5．8g；SDS0．37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至1000ml。
4、0．01MPBS（pH7．4）：NaCl8．0g；KCl0．2g；Na2HPO41．44g；KH2PO40．24g；加ddH2O至1000ml。
5、膜染色液：考马斯亮兰0．2g；甲醇80ml；乙酸2ml；ddH2O118ml。包被液（5％脱脂奶粉，现配）：脱脂奶粉1．0g溶于20ml的0．01MPBS中。
6、显色液：DAB6．0mg；0．01MPBS10．0ml；硫酸镍胺0．1ml；H202 1．0μl。
