这是一道考研题：现需要得到某个基因的蛋白表达产物，用来制备该基因的多克隆抗体，请写出具体的实验方案
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发布时间：2022-11-03 03:28
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时间：2023-10-27 13:24
1.得到目的基因：设计引物（引物上带有酶切位点）→进行PCR，胶回收，酶切，再胶回收，得到带有粘性末端的目的基因→将目的片段连接到具有相同粘性末端的PET载体上
2．得到目的蛋白：将连接好的带有目的片段的载体转入到DH5α菌系中，将菌涂布与相应的抗性LB培养过夜→挑菌→接到相应抗性的液态LB中，摇菌过夜→提取质粒，进行PCR鉴定与酶切鉴定确定转入的不是空质粒→送测→将的到地带有目的蛋白基因的质粒转入到BL21（DE3）菌系中→诱导表达蛋白→进行SDS-PAGE检测是否表达出正确大小目的蛋白→大量诱导→得到表达蛋白的DE3
3.纯化目的蛋白：将菌进行超声破碎→引用Ni-His结合树脂4℃结合过夜→应用不同洗液洗脱得到纯化的目的蛋白→应用BSA对蛋白含量进行定量
4.应用得到的纯化目的蛋白150mg目的蛋白+弗氏完全佐剂对兔子进行一免，以后每次应用150mg目的蛋白+弗氏不完全佐剂加强免疫2-3次（两周加强一次）→最后一次免疫10天后采血→这样就制备得到兔高免血清
5.纯化抗体（可做可不做）：应用抗体纯化试剂盒对得到的血清进行纯化，得到纯化的兔免目的蛋白的多克隆抗体
参考资料：PET载体表达手册
