做cck8没有及时测 在室温有光的情况下静置了10min钟 有影响么
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发布时间：2022-04-23 08:52
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热心网友
时间：2022-06-18 15:33
CCK8操作说明细胞活性检测 1. 在96 孔板中接种细胞悬液 (100 ml /孔 ) 。将培养板放在培养箱预培养 (在37 ℃，5% CO2的条件下 )。 2. 向每孔加入10 ml 的CCK- 8溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D值的读数) 。 3. 将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。 4. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。 5. 如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24小时内吸光度不会发生变化。细胞增殖 -毒性检测 1. 在96 孔板中配制 100 ml的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24小时 ( 在37℃， 5% CO2的条件下 )。 2. 向培养板加入10 ml不同浓度的待测物质。 3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或48小时 )。 4. 向每孔加入10 ml CCK-8 溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D值的读数) 。 5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。 6. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。 7. 如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl溶液或者1%w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24小时内吸光度不会发生变化。注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响。当然药物影响比较小的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。制作标准曲线 1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。 2. 按比例 ( 例如：1/2比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。 3. 接种后培养2-4 小时使细胞贴壁，然后加 CCK-8试剂培养一定时间后测定 O.D值，制作出一条以细胞数量为横坐标 (X轴) ，O.D值为纵坐标 (Y轴) 的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量 (使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK-8后的培养时间)。同仁CCK8检测步骤 CCK-8 检测步骤 1. 向各孔中加入100 μl细胞悬液。a) 2. 在37℃下预孵育培养板。b) 3. 向各孔中加入各浓度的待测溶液c)10 μl。 4. 37℃下孵育。 5. 向各孔中加入10 μl的CCK-8溶液d)。 6. 37℃下孵育1-4小时。e) 7. 测定450 nm处的OD值。 a) 使用适当的培养基制备50,000-100,000个/ml的细胞悬液。 b) 建议使用CO2培养箱过夜预培养。 c) 使用培养基或PBS来制备溶液。 d) 如果待测溶液有还原性，测定不含细胞，但含有CCK-8的待测溶液在450 nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小，则可以直接加入CCK-8 ，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的100 μl培养基和10 μl CCK-8进行检测。 e) 白细胞可能需要培养较长时间。活力计算细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）] ×100 A（加药）：具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度 A（空白）：具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度 A（0加药）：具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度 *细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力 DOJINDO CCK8 初学者问答 (同仁DOJINDO)
热心网友
时间：2022-06-18 15:33
cck8实验方案：
1.在96 孔板中配置100μL的细胞悬液（通常细胞增殖实验每孔加入100μL2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100μL5000个细胞。具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要，进行培养（在37°C，5%CO2的条件下）预培养24 小时。
2.向培养板加入1-10μL 不同浓度的待测药物刺激。
3.将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24 或48 小时）。
4.每孔加入10μLCCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD 值的读数）。如果起始的培养体积为200μL，则需加入20μLCCK-8溶液，其它情况以此类推。可以用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。
5.在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。
6.用酶标仪测定在450nm处的吸光度，如无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。
7.如果暂时不测定OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μL 0.1M 的HCL 溶液或者1% w/v SDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK 之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
