发布网友 发布时间:2022-04-22 13:43
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热心网友 时间:2023-10-16 08:34
PCR反应中是从引物的3‘端开始合成新DNA链的。所以新合成的DNA链中,原来的引物在5‘端,新加入的碱基在3‘端。
引物3’端为关键碱基,是PCR延伸的起始端,不能进行任何修饰,也不能形成二级结构的可能,一般3‘端也不能发生错配,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
5’端无严格*,只起限定PCR产物长度的作用,对扩增特异性影响不大,因此常用来引进修饰位点或标记物。
扩展资料:
PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制。
参考资料来源:百度百科-聚合酶链式反应