蛋白质的鉴定提取(高悬赏)
发布网友
发布时间:2022-07-08 05:24
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热心网友
时间:2022-07-14 08:19
“想确定溶液中的某种活性蛋白”是需要分离还是需要纯化?你说的太笼统了。
分离纯化可直接使用制备型HPLC,当然如果你加了tag的话过柱也是可以的。2DE第二向是变性电泳,如果你要做活性追踪就要当心了。
你的关键问题是蛋白性质、含量都不知道。如果这样的话就要用纯生化手段,大量破碎细胞去分离该蛋白。HPLC分辨率和活性保持率远高于2DE,但由于你不知道该蛋白性质,因此不能确定哪个分离组分是你的目的蛋白,这样就很讨厌。你只能大量的过柱,做活性检测,从高活性组分再做分离如此反复进行,或者你看看有没有文献报道该蛋白的受体或相互作用的蛋白。这样可以用亲和层析来分离。
热心网友
时间:2022-07-14 08:19
呃!·!为难
1:先取个试管放适量淀粉,在将细胞液放入试管,用适量的温度水浴加热2-3分钟,再加入斐林试剂,再沸水浴加热,观察是否有砖红色沉淀。如有,则就有淀粉酶。没有,反之。
2:先放蛋白质,再放细胞液等会再放双缩尿试剂使之充分反应,看看是否变为紫色。没变,则有蛋白酶,否则反之。
哎!你想到什么就测什么。举一反三,你还可以检测是否含有葡萄糖氧化呼吸有关的酶,也是用斐林试剂。
过氧化氢酶,将溶液放到过氧化氢里看气泡的放应速度。并使带火星的木条复燃。
DNA水解酶,将溶液放入提取过的DNA中,用二苯胺检测DNA.DNA遇二苯胺(沸水浴)会变成蓝色。
等等。。
热心网友
时间:2022-07-14 08:20
可以考虑使用Blue Native PAGE。
热心网友
时间:2022-07-14 08:20
过单抗柱?