质粒提取原理

发布网友发布时间：2022-07-06 12:42

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热心网友时间：2023-10-08 17:35

质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA 是进行DNA重组的常用载体作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于细胞的主染色体之外质粒DNA上携带了部分的基因信息经过基因表达后使其宿主细胞表现相应的性状在DNA重组中质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体
从宿主细胞中提取质粒DNA 是DNA重组技术中最基础的实验技能分离质粒DNA有三个步骤
培养细菌使质粒扩增收集和裂解细菌分离和纯化质粒DNA
在质粒提取过程中由于机械力酸碱度试剂等的原因可能使质粒DNA链发生断裂所以多数质粒粗提取物中含有三种构型的质粒共价闭合环状DNA（cccDNA）质粒的两条链没有断裂超螺旋开环DNA（ocDNA）质粒的一条链断裂松弛的环状分子线形DNA（lDNA）质粒的两条链均断裂线性分子质粒DNA的分子构型
质粒DNA琼脂塘凝胶电泳模式图可分为松弛线性的DNA 松驰开环的OC构型超螺旋的SC构型由于琼脂糖中加有嵌入型染料溴化乙锭因此在紫外线照射下DNA电泳带成橘* 道中的SC DNA走在最前沿 OC DNA则位于凝胶的最后边道中的L DNA是经核酸内切*酶切割质粒之后产生的它在凝胶中的位置介于OC DNA和SC DNA之间