测序70bp左右老是出现类似酒精峰的大峰,导致信号较弱,请问怎么回事,是纯化不好吗,
发布网友
发布时间:2022-06-14 15:58
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热心网友
时间:2023-10-19 17:04
大峰就是酒精峰
在70左右出现是正常的
原因是由于纯化的酒精没有挥发干净
一般测序都是用酒精醋酸钠纯化的
离心的时候一开始是3000RPM把PCR产物离到管底
看好是RPM,不是G
然后拿出来轻甩两下
将96孔板倒扣在摇篮上
当离心机达到275(最多300)RPM的时候迅速STOP
而且加速度调到4或者5(平时都是9)
这样转速是缓慢上去的
否则转速一下上去都来不及反应
最后在干燥机里至少干燥40分钟以上
注意就是甩的时候不要太用力
三四下就行
倒扣的时候转速一达到275立马就要停
不然PCR产物全出来了
最后就是干燥的时间稍长一点
我们用的是BECKMAN的离心机和3700XL测序仪
有的时候也会有这种情况
热心网友
时间:2023-10-19 17:04
测序一边前10—100个bp都会有杂乱,和测序机有关系,和纯化关系不大
热心网友
时间:2023-10-19 17:05
测序前后的两端的信号都很乱的,用不了的.看测序仪的好坏,200多bp都有可能.
如果是在序列中间,正常波峰突然变弱的话,有可能是连续一段C或G,GC过高~