瑞氏染色步骤
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发布时间：2022-09-07 20:51
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时间：2023-11-21 09:29
为了观察细胞内部结构，识别各种细胞及异常变化，血涂片必须进行染色。
血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变而来。目前常用瑞氏染色法。
【目的】掌握血涂片的染色方法。
【原理】
把已制成的血细胞分布均匀的薄膜涂片，
用复合染料染色。
其着色的原理包括物理
吸附及化学亲和作用。
不同种类的细胞及同一细胞的不同成分及不结构，
对酸性及碱性染料
的结合能力不同，因而使不同种类的细胞染成不同的颜色，呈现各自的特点。
【器材】我们今天的器材是：载玻片、推片、吸耳球、显微镜。
【试剂】
1
瑞氏染料
由酸性染料伊红(eosin,E)和碱性染料亚甲蓝(methylene
blue,M|+)组成的复合染料。
★亚甲蓝(又名美蓝)为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构，通常为氯盐，即氯化美蓝。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料(即天青)。
★伊红通常为钠盐。
★将适量的伊红，美蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料。
甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红ME，使其解离为M+和E+，后两者可以选择性地吸附于血细胞内的不同成分而使其着色；
二是具有很强的脱水作用，可固定细胞的形态，当细胞发生凝固时，蛋白质被沉淀为颗粒状或者网状，增加细胞结构的表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。
2
瑞氏染液的配制：取瑞氏染料1.0g、甲醇600ml、甘油15ml。
操作如下：将全部染料放入清洁干燥的乳钵中，先加少量甲醇慢慢地研
磨(至少半小时)，以使染料充分溶解，再加一些甲醇混匀，然后将溶解的部分倒入洁净的棕色瓶内，乳钵内剩余的未溶解的染料，再加入少许甲醇细研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完为止。再加15ml甘油，密闭保存。这只就是我们配制的I液。
说明：新鲜配制的染液偏碱，染色效果较差，经在室温下贮存一定时间，美蓝逐渐转变为天青B后方可使用，这一过程称染料成熟。放置时间愈久，天青愈多，染色效果也就越好。但必须盖严瓶口，以免甲醇挥发或氧化成甲酸。染液中也可加中性甘油3ml，防止甲醇挥发或氧化，同时也可使血细胞染色较清晰，但我们所用的甲醇必须纯净。
II液：又称磷酸盐缓冲液(PH6.4-6.8)，包含磷酸二氢钾0.3g，磷酸氢二钠0.2g、蒸馏水加至1000ml。
配好后用磷酸盐溶液校正PH，如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。
也可用蒸馏水代替。
3
染色：①血涂片自然干燥后，用蜡笔在两端画线，以防染色时染液外溢。随后将玻片平置
于染色架上，滴加染液3-5滴，使其盖满血涂片，大约1分钟后，滴加等量或稍多的II液，
用吸耳球轻轻混匀。
②冲洗：染色5-10分钟用流水染液，待干。
③结果观察，
将干燥后的血涂片置显微镜下观察。
先用低倍镜观察血涂片，
再用油镜。
