流式细胞仪的工作原理是什么?

发布网友 发布时间：2022-04-22 23:31

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热心网友 时间：2022-04-27 06:40

流式细胞仪可同时进行多参数测量，信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号。测量是在测量区进行的，所谓测量区就是照射激光束和喷出喷孔的液流束垂直相交点。液流*的单个细胞通过测量区时，受到激光照射会向立体角为2π的整个空间散射光线，散射光的波长和入射光的波长相同。散射光的强度及其空间分布与细胞的大小、形态、质膜和细胞内部结构密切相关，因为这些生物学参数又和细胞对光线的反射、折射等光学特性有关。未遭受任何损坏的细胞对光线都具有特征性的散射，因此可利用不同的散射光信号对不经染色活细胞进行分析和分选。经过固定的和染色处理的细胞由于光学性质的改变，其散射光信号当然不同于活细胞。散射光不仅与作为散射中心的细胞的参数相关，还跟散射角、及收集散射光线的立体角等非生物因素有关。在流式细胞术测量中，常用的是两种散射方向的散射光测量:

①前向角(即0角)散射(FSC);

②侧向散射(SSC)，又称90角散射。这时所说的角度指的是激光束照射方向与收集散射光信号的光电倍增管轴向方向之间大致所成的角度。一般说来，前向角散射光的强度与细胞的大小有关，对同种细胞群体随着细胞截面积的增大而增大;对球形活细胞经实验表明在小立体角范围内基本上和截面积大小成线性关系;对于形状复杂具有取向性的细胞则可能差异很大，尤其需要注意。侧向散射光的测量主要用来获取有关细胞内部精细结构的颗粒性质的有关信息。侧向散射光虽然也与细胞的形状和大小有关，但它对细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏感，也能对细胞质内较大颗粒给出灵敏反映。荧光信号主要包括两部分:

①自发荧光，即不经荧光染色，细胞内部的荧光分子经光照射后所发出的荧光;

②特征荧光，即由细胞经染色结合上的荧光染料受光照而发出的荧光，其荧光强度较弱，波长也与照射激光不同。自发荧光信号为噪声信号，在多数情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和测量。在免疫细胞化学等测量中，对于结合水平不高的荧光抗体来说，如何提高信噪比是个关键。一般说来，细胞成分中能够产生的自发荧光的分子(例核黄素、细胞色素等)的含量越高，自发荧光越强;培养细胞中死细胞/活细胞比例越高，自发荧光越强;细胞样品中所含亮细胞的比例越高，自发荧光越强。

热心网友 时间：2022-04-27 07:58

流式细胞仪主要由四部分组成：流动室和液流系统，激光源和光学系统，光电管和检测系统，计算机和分析系统。四大系统共同完成信号的产生、转换和传输任务。检测时将待测细胞或微粒制成细胞悬液，进行荧光染色后加入样品管中。以一定压力将待测样品压人流动室，在高压下磷酸缓冲液（鞘 液）从鞘液管喷出，鞘液管人口方向与待测样品流成一定角度，这样，鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形流束（鞘流），待测细胞在鞘液包绕下单行排列，依次通过检测区。流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦后的光束，垂直照射在样品流上，当细胞携带荧光素标记物通过激光照射区时，产生代表细胞内部不同物质、不同波长的荧光信号，这些信号以细胞为中心向空间360o 立体角发射，产生散射光和荧光信号。

热心网友 时间：2022-04-27 09:33

首先，机器吸取细胞混悬液，射入由鞘液（一般都是磷酸盐缓冲液）。由于鞘液的流速大，所以细胞混悬液通过轴流的形式在*，一般是单个细胞排队的形式。然后细胞通过检测窗口。有激光束照射。一般细胞都经过荧光染色，被激光照射后，会有不同波长的激发光产生。机器设有检测器来探测激发光的强弱根据激发光的强弱，来判断细胞和染色物质的结合情况，从而得到要检测的结果（比如抗原量，DNA量，等等）什么是流式细胞仪：流式细胞仪(FCM)是集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器。流式细胞仪的应用领域：流式细胞仪是仪器设备中的生物器械，属于分子生物范畴。流式细胞仪，已广泛应用于：免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。