发布网友 发布时间:2022-04-22 23:56
共1个回答
热心网友 时间:2023-05-21 11:48
酵母质粒载体都是利用酵母的2μm质粒和其染色体组分与细菌质粒pBR322构建而成的,能分别在细菌和酵母菌中进行复制,所以又称为穿梭载体。主要有以下三种:(1)附加体质粒(episomal:plasmid):该质粒载体含有来自细菌质粒pBR322的复制起点并携带作为大肠杆菌选择标记的氨苄青霉素抗性基因(emphasis:role=italicAmpsuperscriptrsuperscriptemphasis)。
此外还有来自酵母2μm质粒的复制起点以及一个作为酵母选择标记的URA3基因(尿嘧啶核苷酸合成酶基因3),这种质粒特点:既可在大肠杆菌中也可在酵母细胞中复制,当重组质粒导入酵母细胞中可进行自主复制,且具有较高拷贝数。
(2)复制质粒(replicating:plasmid):该质粒含有来自细菌质粒pBR322的复制起点和作为大肠杆菌选择标记的氨苄青霉素抗性基因(emphasis:role=italicAmpsuperscriptrsuperscriptemphasis)和四环素抗性基因(emphasis:role=italicTetsuperscriptrsuperscriptemphasis)。还有来自酵母染色体的自主复制序列(ARS),以及作为酵母选择标记的emphasis:role=italicURAemphasis3基因和emphasis:role=italicTRPemphasis1基因(色氨酸合成酶基因1),能在大肠杆菌或酵母细胞中复制,重组质粒导入酵母细胞中可获得中等拷贝数的质粒。
(3)整合质粒(integrating:plasmid):该质粒含有来自大肠杆菌质粒pBR322的复制起点和作为大肠杆菌选择标记的氨苄青霉素抗性基因(emphasis:role=italicAmpsuperscriptrsuperscriptemphasis)和四环素抗性基因(emphasis:role=italicTetsuperscriptrsuperscriptemphasis)。以及来自酵母的emphasis:role=italicURAemphasis3基因,它既可以作为酵母细胞的选择标记,也可与酵母染色体DNA进行同源重组。这种质粒可在大肠杆菌中复制,但不能在酵母细胞中进行自主复制。一旦导入酵母细胞,可整合到酵母染色体上,成为染色体DNA的一个片段。