发布网友 发布时间:2022-04-29 22:57
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热心网友 时间:2023-10-10 00:52
咨询记录 · 回答于2021-11-22空白实验组水转化的大肠杆菌能在涂布的含氨苄的LB固体培养基平板上长出菌落吗?如果长出说明什么?可能原因是什么?涂板后培养12个小时,平板不长菌或者只长五六个菌斑平板不长菌,感受态细胞是否失活,可以做个对照,看看是否是感受态细胞的问题,如果不是,就要考虑转化过程是够出现操作失误,例如未在冰中进行转化,感受态在常温下放置过久失活,转化后摇菌时间过短,或者摇床速度过慢,没有把菌摇起来,如果不是转化过程出现的问题就要进一步考虑连接是否正确,连接时间12~16h,体系一般6ul-10ul,目的片段:载体一般1:3~1:10.只长五六个菌PCR检测空白或者目的条带不对,这个你可以考虑做蓝白斑,初步可以筛掉一大批的假阳性,目的条带不对估计是载体自连了.另外卫星菌落的话不需要太顾虑,培养时间久了,氨苄降解了很多假阳性自然就长出来了,氨苄只是抑制不是杀死,一般12h内的菌落都不会出现卫星菌落.