荧光显微镜检测。细胞悬液怎么做?我要做贴壁细胞 用胰酶消化?
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发布时间：2022-04-29 14:20
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时间：2023-10-10 08:14
博凌科为解答：1．贴壁细胞 ，让细胞自己在盖玻片上爬片。操作如下：A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。 将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。B. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。C. 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。D. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。也宜用摇床，或手动晃动数次。E. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。F. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。使细胞接触封片液，切勿弄反。G. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。2. 悬浮细胞A. 离心收集细胞样品于1.5ml离心管内，加入0.5ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。B. 离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。洗涤期间手动晃动。C. 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50ml液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。D. 稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。E. 均匀滴上0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。用吸水纸从边缘吸去液体，微晾干。F. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。G. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。H. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。3. 组织切片A. 常规包埋切片后，脱腊，透明。B. PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。可在六孔板中操作。C. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。也宜用摇床，或手动晃动。D. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。E. 将切片置于载玻片上，滴一滴抗淬灭封片液，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。F. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
