蛋白杂交的PVDF膜可以先后用两个抗体杂交吗

发布网友发布时间：2022-04-28 15:24

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热心网友时间：2022-06-19 10:13

可以。不过这个方法不适合用DAB等方法染色的。

关于用的液体，在下面，供参考：
在Western Blotting试验中，完成第一轮杂交后，经常需要重复使用同一张膜，进行第二次/第三次杂交，最为常见的情况包括：
（1）内参杂交。Tubulin等内参蛋白是在不同的组织细胞中普遍等量表达的蛋白，通过杂交，获取等量蛋白上样内参(equal loading control)，从而确实目的蛋白表达的增加或减少。
（2）信号传递研究中，检测其他目的蛋白。
（3）检测目的蛋白的磷酸化（phosphorylation）或甲基化（methalation）后，继续检测总目的蛋白的表达。
利用同一张膜进行多次蛋白检测，不仅节省蛋白样品、省略蛋白电泳和膜转移等耗费性步骤，而且可消除重新上样带来的误差，使可比性更强。
进行新一轮杂交前，需首先去除第一轮杂交时结合在膜上的一抗和二抗。传统的方法是使用具有强烈刺激性臭味的b-巯基乙醇（b-Mecaptomethanol)， 55℃水浴振荡30分钟，操作极不方便。
华特生Western Stripping Solution 不使用b-巯基乙醇，只需室温条件下20～30分钟，即可去除前一轮杂交时结合在膜上的一抗和二抗。同时不破坏膜上的蛋白抗原，不导致蛋白信号的减弱，可重复使用2～4次，且背景干净。