求救:翻译一篇生物学论文

发布网友发布时间：2022-04-27 12:24

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RNA聚合酶四指示
沉默的内源性的DNA

我们先前发现的一种拟南芥sde4
突变说，展出的部分失去一个transgenesilencing
通路是否则依赖
对RNA依赖的RNA聚合酶六日
（ rdr6 ）（ 1 ）。该sde4突变体植株还
有缺陷的小分子干扰RNA （小分子干扰核糖核酸）
生产和甲基正弦retroelement
atsn1 （ 2 ）在通路其后
相关rdr2 ， Dicer的样三日
（ dcl3 ），以及其他内源性的siRNA （ 3 ）。它
很可能，这沉默通路相关
以RNA干涉（ RNAi技术）介导heterochromatinization
在schizosaccharomyces
pombe这也是依赖于小分子干扰核糖核酸， Dicer的，
andanrdr （ 4 ）。所以，要调查
机制的两个转基因与retroelement
沉默，我们查处的分子
身份的sde4轨迹。我们这里所叙述
如何sde4编码最大亚基一
编码RNA聚合酶是有别于
真核细胞的RNA聚合酶的一，二和三
（其亚基在拟南芥中被指定
由前缀nrpa ， nrpb ，或nrpc ，分别）。
在符合公约
命名的RNA聚合酶的，我们从今以后参考
这种酶作为RNA聚合酶四（油料
四）和世界上最大的亚基编码sde4
作为nrpd1a 。先前所描述的sde4
突变是现在指定nrpd1a - 1 。

1sainsbury实验室，约翰建设起中心，诺里奇
nr4 7uh ，英国。 2university东英格兰，诺里奇
nr4 7tj ，英国。

*向谁函授应予以处理。
电子邮箱： david.baulcombe @是Sainsbury - laboratory.ac.uk

屏幕上有缺陷的突变体，在跨
基因沉默用一种拟南芥线
（ gxa ），其中绿色荧光蛋白
（ GFP ）的转基因（图s1a ，指定G ）的
鸦雀无声，由马铃薯X病毒（ pvx ） -绿色荧光蛋白
转基因（图s1a ，指定一）（ 1 ）。不像
rdr6突变体，其中完全失去绿色荧光蛋白
沉默在gxa背景下， nrpd1a - 1
展示了一幅延迟性发作的沉默中
生长点的植物（图1A和图。
s1f ）（ 1 ）。在年轻的植物，叶片初期
涌现出绿色荧光蛋白的荧光，而且，在一个星期内，
沉默出现在局部地区，然后
散布在整个叶片。这种迟发性
表型的坚持，直到开花的时候
年轻的花序均GFP的荧光。

该模式的转基因mRNA和
小分子干扰核糖核酸积累相应的
数额GFP的荧光。因此，北
分析野生型和nrpd1a - 1鲜花
表明，增加积累的GFP
mRNA的表达（ 4.5倍）和pvx -绿色荧光蛋白基因的RNA
nrpd1a - 1对应到六倍减少
21日至24日-核苷酸（ NT ）的绿色荧光蛋白的siRNA （图
1B ）条相对野生型。在完全沉默
玫瑰花叶，那里nrpd1a介导的损失
沉默是不太明显高于
花卉，绿色荧光蛋白基因和siRNA金额
媲美。

RNA介导的DNA甲基化（ rddm ）
是与沉默的植物，并
可能导的一个小分子干扰核糖核酸引导效应
复杂的。一致rddm在绿色荧光蛋白
轨迹gxa植物，绿色荧光蛋白基因的DNA甲基化是
迷失在鲜花的rdr6和sgs3突变体沿

23 。长pfeifhofer等人，威廉斯年限。地中海。 197 ， 1525 （ 2003 ）。
24 。汤匙egawa等人，电流。生物学。 13 ， 1252 （ 2003 ）。
25 。支持由美国国家卫生署（ r37 - ai33443 ）。我们想
谢谢j. pober ，每小时十孙，和D罗斯坦为
认真研读了这份手稿和第十林（大学
水牛），为分享card11缺陷
Jurkat细胞。分子相互作用数据已
存放在生物分子相互作用网络
数据库与加入代码209039到209044 。
支持在线材料

www.sciencemag.org/cgi/content/full/308/5718/114/
无线TTL闪光灯
材料与方法
无花果。中一至中三

2004年11月4日;接受， 2005年1月14日
10.1126/science.1107107

与绿色荧光蛋白的siRNA （ 1 ）（图1 C ）。在nrpd1a - 1
花卉，如绿色荧光蛋白的siRNA都减少，但
不缺席，我们只发现有轻微变化
该模式GFP的DNA甲基化（图1 C ）
这反差更明显的损失
atsn1 DNA甲基化nrpd1a - 1植物
（ 2 ， 5 ）。因此， nrpd1a通路，是不是
唯一来源合适的siRNA为rddm 。

当初nrpd1a - 1 ，在相当大的重排
1号染色体扰乱
at1g63020 （图中一，二至七），然后用
其他nrpd1a等位基因与互补
同一个nrpd1a转，以确认
这种基因编码的nrpd1a 。序列
nrpd1a不结盟与拟南芥nrpd1a
同源（编码at2g40030 ）和两个
编码蛋白质的水稻植物特有
分支为最大亚基的RNA
聚合酶（图2A及fig.s2 ， A至C ）。
一致nrpd1a作为世界上最大的
亚基一multisubunit油料四，食米
和拟南芥基因组编码两个
蛋白质可以成为第二大
亚基（ at3g18090和at3g23780 ）（ 6 ）
（图2B和图s2d ）。测试沉默
的作用，这些基因拟南芥nrpd2
亚基，我们转化野生型gxa
植物倒置重复序列（ IR ）的构造说
将目标对准了RNAi以nrpd1a ，疑似
nrpd2基因，或阿丹（作为对照组）（图三，
A和B ）。转化与红外
针对nrpd1a与疑似
nrpd2基因，但并不反对阿丹（图三， c
及d ），呈现延迟性发作的沉默
这样的nrpd1a - 1 。虽然两者nrpd2
基因将被灭活，由红外兴建
（图s3b ），两条路线的证据表明，
积极nrpd2轨迹，而不是at3g23780
比at3g18090 。第一，基因特异性扭转
转录聚合酶链反应（ RT - PCR ）
分析结果表明，大部分的nrpd2
誊来自at3g23780 （图s3e ）
及第二，在一个插入突变体at3g23780
（ nrpd2a - 1 ，图s3f ），但不at3g18090
（ nrpd2b - 1 ，图s3f ）消除了内源
小分子干扰核糖核酸（图3A ）在。

nrpd1a和nrpd2有顺序的异同
他们nrpa ， nrpb ， nrpc
同系物，在地区相应的功能
重要的特点，酵母RNA聚合酶

2005年4月1日第一卷308科学www.sciencemag.org

报告

图。 1 。 GFP的沉默nrpd1a - （一） 1 。紫外线照片gxa野生
型（ WT ）的，并nrpd1a - 1开花植物。（二）北方分析绿色荧光蛋白
mRNA的表达和siRNA在花卉（六），茎（ s ）和叶（ 1 ）由WT和
nrpd1a - 1 gxa植物。（三） Southern blot分析基因组DNA纯化

二（ 7 ）。为nrpd1a ，地区与认同
nrpb1包括N端钳核心
（ 20 ％），锌金属结合位点，活跃
网站（ 41 ％），漏斗和部*隙
域（初， 42 ％，末位淘汰，有24 ％）。该
中的裂隙域nrpa1 ，
nrpb1 ， nrpc1缺席nrpd1a
（保守区七）（图s2b ）。然而，
C端钳核心（图s2b ），它定义了
年底球形域之前
C端域（ CTD是） nrpb1 （ 7 ），是
目前（ 23 ％相同）。 nrpd2是34 ％相同
以nrpb2并保守区
相对应的结合位点小
核心亚基（ nrpb3/ac40 ， nrpb10 ，
nrpb12 ）（图s2d ），这是思想的发挥
作用于酶大会（ 7 ）。有多重
基因nrpb3/ac40 ，有些企业
他们可以油料四的具体情况。然而，对于
nrpb10和nrpb12现在只有两个基因
每一个在拟南芥中，他们可以分享
油料之间的第四和其他的RNA聚合酶
因为他们是在其他真核生物（ 8 ）。

最引人注目的区别
nrpb1和nrpd1a是在C端的
nrpd1 ，如水稻和拟南芥
蛋白质分享相似的C端
半数一个无编码的蛋白（有缺陷
叶绿体和叶片）规范S rRNA基因
加工叶绿体（ 9 ）（图s2a ）。这
C端延伸，可协调的RNA
聚合酶活性与下游加工
步骤，在方式上类似于向
CTD是ofpolii （ 8 ）。结合本
不寻常的C端与保守的特点
义RNA聚合酶表明，波兰四是
积极RNA聚合酶与重要分歧
从义RNA聚合酶的一，二和三。

来自同一组织中，作为第（二）项，消化与甲基化敏感性
酶sau96i ，摸索出为GFP的。 unmethylated G和gxa sgs3线
作为对照。 DN*段大于554新台币，是由于DNA的
甲基化。

图。 2 。进化树
最大型的（ a ）和
第二大（二）的RNA
聚合酶亚基家庭
从植物中，蠕虫和
酵母。 itoivonthe权
对每棵树显示核糖核酸
聚合酶亚科。灰色
和黑盒子显示
拟南芥油料四亚基。

为了进一步探讨机制的油料
四介导的沉默，我们的另一个特点是
突变与迟发性GFP的沉默
（图s4a ）。它有一个倒置4号染色体
这会破坏rdr2 （图s4b ， rdr2 - 3 ），以及
绿色荧光蛋白基因沉默的表型能够加以补充
通过改造与野生型rdr2
基因组DNA （图s4a ）。在这突变，因为在
nrpd2a - 1和的每一项nrpd1a突变，有
获得较低的数额内源性24 -新台币
siRNA （即atsn1 ， 1003 ， 02 ，与第2组），比
在野生型，而mir167数额
未受影响（图3A ）在（ 3 ）。这些的siRNAs都
在24新台币大小级，并dcl3 Dicer的是
参与它们的生源（ 3 ）。这是有可能
因此，油料四， rdr2 ， dcl3法
团结起来，为一个沉默的门路。油料四将
产生的RNA的物种被复制到
双链RNA （双链RNA ） rdr2 。
这种双链RNA ，然后被加工成
小分子干扰核糖核酸由dcl3 。

该rdr2和rdp1突变，也
受长期的RNA ，由小分子干扰核糖核酸基因位点。
然而，相反的影响，对小分子干扰核糖核酸，
长期的RNA更为丰富，在沉默
突变体。因此， atsn1 RNA的更多
丰富的，在nrpd1a和rdr2突变体比
在野生型植物（图3 C ）条，显示
他们不是油料四誊本。据推测，这
RNA的结果必须由RNA聚合酶三
转录（ 10 ） atsn1是沉默
该油料四- rdr2 - dcl3通路在野生型
植物。我们无法侦测，只要油料四
誊atsn1是推测这是因为
他们目前只是非常低的数额和
都是蒙面更丰富的RNA产生
其他的RNA聚合酶。

该油料四- rdr2 - dcl3通路相关
与第2组和2002年的siRNAs并不要求
ago4或DNA甲基化（ 3 ）。然而，
该atsn1和1003点是hypermethylated
在野生型植物相对向nrpd1a万亩

www.sciencemag.org科学卷308 2005年4月1日

报告

图。 3 。分子指标的沉默。（一）北部的分析里9日，九仓;巷10 nrpd1a - 3泳道11 ， nrpd1a - 4 ; lane12 ， nrpd2a - 1泳道13
内源性小RNA ：车道1日至8日， gxa （ C24为）背景;车道9日至nrpd2b - 1 。污点被剥夺和reprobed成倍增长。（二）南区
13 ，中校- O的背景。 1行，每克;巷2 ， rdr2 - 3线3条和第4 ，两个分析五常rDNA的重复序列在nrpd1a一系列等位基因消化后，与
独立rdr2 - 3 rdr2p ：： rdr2 T2合资格线;巷5 ， nrpd1a -1 ;车道6and 7 ，甲基化敏感性酶hpaii 。（三） RT - PCR分析的内源性
两个独立nrpd1a - 1 nrpd1ap ：： nrpd1a T2合资格线;巷8 nrpd1a - 2 ; atsn1誊是高架在rdr2 - 2和nrpd1a突变体。

tants （ 2 ）（图3B ）条中，并积累自己
的siRNAs是依赖于argonaute蛋白
ago4 ，从头DNA甲基转移酶
drm1 anddrm2 （五日，十一日，十二日），以及油料
四， rdr2 ， dcl3 。在这些例子中，它
看来，我们已建议在第pombe
（ 13 ），即维持沉默涉及
自我强化沉默通路在其中
油料四介导的siRNA生产是依赖
关于ago4介导的DNA甲基化
反之亦然。

theroleofpol四所述herecould
解决的一个悖论染色质沉默
机制是依赖于RNA的。如果
该沉默的基因转录是由一个单一的
聚合酶，这种RNA依赖的机制
不会稳定，因为*
转录从这些位点
也将导致亏损沉默的RNA 。
然而，沉默特异性聚合酶像
油料四，可耐染色质或DNA
修改影响聚合酶一至三
等，可以稳定地保持沉默
状态。在动物和真菌的油料四分支
缺席的，但沉默的悖论可能
解决了，如果有形式的核糖核酸
聚合酶一至三与沉默-具体
亚基，使转录的异染色质
，因此，维修
该RNA依赖的沉默。

最后一点，一般约沉默
机制是说明了GFP的跨
基因沉默与内源性24新台币的siRNA
沉默的通路都是依赖
对共和联盟蛋白质（图1018 ）。在玫瑰叶子
该植物的，这两个沉默途径
是相互独立的，因为跨
基因沉默是不受rdr2 （图1018 ）
由于内源性24nt的siRNA坚持
在rdr6植物（ 2 ）。然而，在这些花朵
通路是相互依存的，因为绿色荧光蛋白
沉默是受两rdr2和rdr6 。
这种潜在的沉默通路互动，
结合自己的能力，以形成
反馈和自我加强的循环（ 14 ），说明
潜在的复杂性内源性
监管网络涉及的siRNAs 。

参考文献及债券

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12 。四zilberman ，十曹时，雅各布森，科学， 299 ， 716
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science.1079695 ）。

13 。汤匙杉山爱，每小时
凸轮，甲弗德尔，四莫阿塞德，第行列
grewal ，过程。 natl 。 acad 。工商局*。美国102 ， 152 （ 2005 ）。
14 。四baulcombe ，性质， 431 ， 356 （ 2004 ）。
15 。作者承认资金来自盖茨比
慈善基金会，生物技术和生物
科学研究委员会，以及婴儿，校
威康基金（ a.j.h. ）以及技术
援助的影响。
支持在线材料

www.sciencemag.org/cgi/content/full/1106910/dc1
材料与方法
无花果。中一至中四
表S1和S2
参考文献及债券

2004年10月29日;接受， 2005年1月25日
在网上公布2005年2月3日;
10.1126/science.1106910
包括这方面的资料时，引用这个文件。

平移算子的基因
对核糖体：如何抑制物
蛋白质排除核糖体约束力

lasse詹纳， 1帕斯卡romby ， 2伯纳德里斯， 1
克莱门斯舒尔策- briese ，三是学生，施普林格， 4 chantal ehresmann ， 2
伯纳德ehresmann ， 2人Dino moras ， 1 gulnara yusupova ， 1
赛yusupov1 ， 2 *

核糖体的热嗜热是cocrystallized与发起人转让
核糖核酸（ tRNA分子）和一个结构完整信使核糖核酸（ mRNA的）携带一个平移
运营商。道路mRNA的定义是在5.5埃决议
它比较，无论是与晶体结构相同的核糖体复杂
缺乏表达或联同非结构化mRNA的表达。一个确切核糖体环境
岗位操作者的茎环结构垂直于表面的
核糖体在该平台上的30年代亚基。有约束力的操作者和
首倡者的tRNA发生于核糖体与一个无人居住的tRNA撤离现场，
这是预期为起始复杂。定位监管
域的经营者相对核糖体阐明了分子
机制，即约束抑制物开关过翻译。我们的数据
建议一般以何种方式表达控制元素必须放在了
核糖体，以履行自己的监管任务。

起始翻译一般认定时，应变能力快的需要。有约束力的
效率促进蛋白质的合成，是eubacterial核糖体涉及的几个要素
关键的一步，为控制基因表达的基因，其中影响动力学的研究

2005年4月1日第一卷308科学www.sciencemag.org

希望能和你成为朋友