4MUP是发光剂吗?

发布网友发布时间：2022-04-28 22:41

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热心网友时间：2022-06-24 10:49

超敏ECL化学发光试剂(LumiPico? ECL Reagent) 　一、用途：　　本试剂是非放射性发光系统，用于检测固定在膜上的蛋白，其敏感性达1-5pg。用X光片可快速地获得永久的硬拷贝结果。所含独特的底物足以维持12小时以上的发光，便于反复曝光操作，免疫印迹膜经抗体脱卸处理后可供再次抗体探查使用。适用于痕量蛋白或核酸检测。特别节省抗体(一抗1:500-1:5000，二抗1:3000-1:10000)。二、原理：　　辣根过氧化酶使试剂中的发光物（Luminol）氧化并发光，而试剂中含有增强剂这使得发光增强了1000倍。在免疫印迹中，将复杂的蛋白混合物经SDS-PAGE分离，并转移到固相膜上（如NC、PVDF）等，用于免疫学检测，经HRP标记的抗体与膜上的蛋白直接（标记一抗）或间接（标记二抗）反应。当加入免疫印迹化学发光试剂后，Luminol发生氧化降解，并发射波长为428nm的光，此光可经X光胶片(放射自显影片)感光记录下来。三、使用方法：1. 印迹膜制备按常规方法完成SDS-PAGE和电转膜操作，适当的封闭非常重要。可以通过标记一抗或二抗的手段引入HRP，一般采用市售的HRP二抗交联物。仔细地淋洗对于降低背景非常重要，在与HRP交联物温育后，膜片更需仔细洗涤，所有步骤均在室温下完成。2. 化学发光试剂的配置在使用前等量混合A液和B液，混合后尽快使用。将膜片置混合液中于室温下振荡温育2分钟，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆盖全膜片。3.蛋白信号显现1). 用平头镊钳住膜片，垂直置于吸水纸以吸去过量试剂。2). 置膜片于二层保鲜膜之间，小心赶尽气泡。3). 将膜片吸附蛋白面朝上，置于X光片盒中。4). 于暗室中压上X光片。5).根据信号的强弱适当调整曝光时间，一般为1min或5min，也可选择不同时间多次压片，以达最佳效果。显影冲洗。6). 调节曝光时间，再次曝光显影。4、膜的重复使用：配置62.5mM Tris-Hcl,PH6.7,2%SDS, 7ml/100ml的巯基乙醇的溶液，膜放入后，70?C振荡水浴30分钟。再用TBST或PBST缓冲液洗脱，最后用BSA（牛血清白蛋白）或牛奶封闭。