如何看QRT-PCR 结果中的Cq值

新版的软件都叫Cq值，不叫Ct值了，不必理会。Ct值15－25是最好，10－30之间也接受。如果超过30了，得看一下复孔是否一致，如果一致，也接受。如果不一致，基本就是废的。

qRT-PCR基于cDNA模板通过荧光信号实时监测扩增过程，Ct值代表荧光信号达到预设阈值的循环数。实验中，扩增曲线评估引物效率，理想的是一次性峰值，保证结果准确性。而 Livak法的步骤如下：计算对照组（wt）和处理组（mut）的内参基因（如ATCB）Ct值均值。计算目标基因（OCA2）的Ct值与内参基因的差值（...

RQ:相对量值 RQ Min：相对量值最小值 RQ Max：相对量值最大值 CT：阈值线与扩增曲线的交点所对应的循环圈数 CT mean：CT值的平均值 CT SD：CT值的标准偏差 △CT：某个组织/样品中管家基因与目的基因扩增片段CT值的差值 △CT mean：△CT的平均值 △CT SE（应该是SD吧）：△CT的标准偏差 △...

反转录的时候按照试剂盒的要求转录特定质量的RNA（RNA的浓度可以通过分光光度计测定），反转完后按照推荐的比例稀释产物即可，一般确保你要的基因的Ct值在20~25比较理想 对于同一类生物样本，提取三份RNA（每份RNA都应包含若干不同的生物个体）并反转录，分别Q，这叫生物学重复；Q同一个基因的时候平行3...

这样算：你先把几次试验的对照组的平均值设为1, 再把每个单独试验对照组的数值算出和这个对照组平均值的差异，就可以计算标准差了。这么简单的统计分析，用不着SPSS吧， excel就可以解决了。

判断数据之间的显著性差异。在选择分析方法时，需根据研究的具体需求与数据类型进行判断。例如，问卷研究中，若比较类别为两组，可使用独立样本T检验或单因素方差分析。若比较类别超过两组，尤其是涉及多个因素时，方差分析更为合适。T检验与卡方检验各有专长，适合不同类型的分析需求。

现在我想自己把数据整出来之后用excel或者graphpad之类来做柱状图，但是现在不知道error bar应该怎么做，我仔细看了下仪器的分析结果，好像它的error bar用的是RQ max和RQ min，所以请问一下，这里的error bar难道不是用SD么？我的SD是用目的基因CT减去内参CT之后的值计算的，高的时候有0.23。但是用SD...

首先为了建立标准曲线，需要已知拷贝数浓度的标准品，对标准品进行5次以上的连续梯度稀释，将稀释的标准品进行实时荧光定量PCR扩增，最后根据各样品的拷贝数浓度及相应的Cq值绘制标准曲线，得到线性方程Cq= -klgX0+b，其中X0为起始模板量。然后将未知样本的Cq值与此标准曲线进行比较，确定其拷贝数浓度。...

设计引物时，需遵循特定原则，如利用保守区设计，保持特异性。引物长度在17-25个碱基之间，G+C含量在40%-60%之间，TM值在58-62度之间。避免引物间的二聚体和自二聚体、发卡结构，以保证扩增特异性与效率。通过oligo 7等软件检测引物的二级结构，确保无不良结构。扩增效率检测是确保qRT-PCR结果准确性...

反转录酶(reverse transcriptase)是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA（cDNA）的酶。qrt-pcr原理和方法 以基因的cDNA为模板进行PCR扩增，在PCR扩增过程中，通过收集荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct 值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以可以定量。