为什么质粒和PCR产物需要拿去测序啊

发布网友发布时间：2022-04-28 21:41

共2个回答

热心网友时间：2022-06-23 07:57

　　质粒和PCR产物需要拿去测序有2个目的，一是验证插入序列的DNA序列是否无误。第二是看插入的方向和位置是否正确。如果做定量PCR用到质粒的话，一般是用来做标准曲线的。
　　聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DN*段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。由1983年美国Mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易DNA扩增法，意味着PCR技术的真正诞生。到如今2013年，PCR已发展到第三代技术。1973 年，台籍科学家钱嘉韵，发现了稳定的Taq DNA聚合酶，为PCR技术发展也做出了基础性贡献。
　　PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。

热心网友时间：2022-06-23 07:57

质粒如果需要测序，说明你们实验室对这个质粒中插入的基因序列不清楚，需要通过测序知道其中到底是什么基因，绝大多数情况下是做了克隆之后需要去确认插入到目的载体中的序列是不是正确，这样才能进行下一步的实验。PCR产物测序一般是为了确认PCR产物序列的正确，因为PCR过程中有可能会发生突变或者其他导致序列改变的情况，只有确认之后才能进行后续实验。