发布网友 发布时间:2022-05-16 19:25
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热心网友 时间:2023-05-22 23:47
dntp指的是脱氧核糖核苷三磷酸。N是指含氮碱基,代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA合成中,以及各种PCRRT-PCRreverse transcription PCR,Real-time PCR中起原料作用。
dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中最初的贮存液可稀释到10mol/L分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20200μmol/L之间。4种dNTP必须等浓度配合以减少错配误差。
使用浓度
dNTP在PCR反应中,使用低dNTP浓度,可减少非靶位置启动和延伸时的核苷酸错误掺入。一般可根据靶序列的长度和组成来决定最低dNTP浓度。
例如在100μl的反应体系中,4种dNTP的浓度为20μmol/L,可基本满足合成2.6μg DNA或10pmol/L的400bp序列。使用低dNTP浓度每种dNTP浓度为2μmol/L,能够高度灵敏地1/107扩增ras基因点突变的等位基因。